T7 高产量 RNA 合成试剂盒——用于研究的高效 RNA 合成
T7 高产量 RNA 合成试剂盒 优化了转录反应体系，该试剂盒利用T7 RNA聚合酶，以含有T7启动子序列的线性双链DNA为模板，以NTPs为底物控制启动子下游的DNA序列，高效地合成单链RNA，转录过程中可在底物上添加修饰核苷酸，制备生物素或染料标记的RNA。
1. T7高产RNA合成试剂盒介绍
2. 原则 体外 转录
3. 优点
4.产品性能
5. 如何使用本套件
6. 常见问题
7. 订购信息
1. T7高产RNA合成试剂盒介绍
T7高产RNA合成试剂盒既可以合成长转录本，也可以合成短转录本，每1 μg DNA模板投入即可生成100-200 μg RNA，合成的RNA可用于RNA结构与功能研究、RNase保护、探针杂交、RNA干扰、显微注射等下游应用。 体外 翻译。
2. 原则 体外 转录
图 1. 体外 转录过程
3. 优点 Yeasen T7 高产量 RNA 合成试剂盒
产量极高——2 小时内产量高达 200 µg
多功能——适用于20nt-10000nt RNA转录本
多种用途——生成未标记、标记或加帽的 RNA
4.产品性能
图 2. IVT 良率比较
注：所有反应试剂均来自 T7 RNA 合成试剂盒 （
图3. 不同长度的转录产物质量
图4. HEK-293细胞中转录mRNA表达水平
注意：mRNA 被痘苗病毒加帽酶加帽（
5. 如何使用本套件
5.1 解冻试剂
将T7 RNA Polymerase Mix短暂离心后置于冰上，将10×Transcription Buffer和核苷酸（ATP、CTP、GTP、UTP）解冻，混匀后离心至管底，将10×Transcription Buffer放室温，将四种核苷酸置于冰上。
5.2 按下表配制转录反应体系
表 1.转录反应体系的制备方法
| 成分 | 容量（μL） | 最终浓度 |
| 无 RNase H2哦 | 最多 20 | - |
| 10×转录缓冲液 | 2 | 1× |
| CTP / GTP / ATP / UTP (各 100 mM) | 各 2 个 | 每个 10 毫米 |
| 模板DNA | 1 微克 | - |
| T7 RNA 聚合酶混合物 | 2 | - |
笔记：
a) 反应在室温下进行，由于10×Transcription Buffer中含有亚精胺，低温下亚精胺浓度过高会导致DNA模板沉淀。
b) 短转录本（<100 nt），可使用2 µg 模板，转录时间增加至4-8 小时。
c) 对于长转录本（>1000 nt），建议使用线性化的质粒模板进行转录。
d) PCR仪中反应应在热盖打开的状态下进行，防止反应液长时间蒸发。
e) 反应产物中可能会有白色沉淀，这是反应过程中游离焦磷酸盐与镁离子形成的焦磷酸镁，不影响后续实验，可以加入EDTA去除，如果担心加入EDTA影响后续实验，也可以离心回收上清液。
f) 试剂和容器不得受到RNase污染。
5.3 37°C 孵育 2 小时
将上述反应液混匀，短暂离心至管底，37°C 反应2h，若转录本长度不足100nt，则延长反应时间至4-8h。
5.4 DNase I 处理（可选）
反应完成后，每管加入2 μL DNase I（无RNase），37°C 孵育15分钟，以去除模板DNA。
6. 常见问题
6.1 IVT反应产率低
模板质量与产量密切相关，如果实验组的产量明显低于阳性对照组，则可能的原因如下。
① 模板中含有抑制IVT反应的成分。
② 模板有问题。
6.2 建议
①重新净化模板。
②确认模板的浓度和完整性。
③延长反应时间。
④增加模板的输入。
⑤尝试其他RNA聚合酶和相应的启动子。
6.3 短转录本产量低
如果目标转录本短于100nt，可延长反应时间为4-8小时或增加模板输入量至20μL反应体系中的2ug。
6.4 有意外的更长的转录本
如果凝胶电泳结果显示有意外的较长的转录本，则可能的原因是：
① 质粒模板可能未完全线性化。
②模板具有带 3' 突出端的粘性末端。
③转录本具有未完全变性的二级结构。
6.5 建议
①检查质粒模板是否完全线性化。如有必要，请重新进行质粒线性化。
②选择合适的限制性内切酶将质粒模板线性化，避免产生3′突出端的粘性末端，必要时可使用Klenow片段或T4 DNA聚合酶产生平末端。
③利用变性凝胶检测转录本。
6.6 有意外的较短抄本
如果凝胶电泳结果显示有意外的较短的转录本，则可能的原因是：
①模板中存在与T7 RNA聚合酶终止序列类似的序列。
②模板GC含量高。
6.7 建议
①降低反应温度（比如30℃），但注意有时降低反应温度会降低产率。
②尝试其他RNA聚合酶催化IVT反应。
③如果模板GC含量较高，可将IVT反应温度设定为42℃或在IVT反应体系中添加SSB，以提高产量和转录本的长度。
6.8 凝胶电泳过程中转录本出现拖尾
如果在凝胶电泳过程中出现转录本的拖尾现象，可能的原因有：
①实验操作过程中有RNase污染。
②DNA模板被RNases污染。
6.9 建议
①确保所有试剂均采用RNase-free H2O配制。实验操作过程中请使用RNase-free枪头和Eppendorf管，佩戴一次性乳胶手套和口罩。
②重新纯化DNA模板。
7. 订购信息
以下是
我们还可以提供定制服务。如果您对未显示的产品感兴趣，请联系我们，我们将与您合作以满足您的需求。
表 2.产品信息
| 产品名称 | 库存单位 | 规格 |
| CleaScrip™ T7 RNA 聚合酶（低 ds RNA，250 U/μL） | 10628ES | 10/100 库拉索 |
| T7 高产量 RNA 合成试剂盒 | 10623ES | 50/100/500 吨 |
| T7 RNA 聚合酶 GMP 级（50 U/μL） | 10624ES | 5000/50000 美国 |
| T7 RNA聚合酶GMP级（250 U/μL) | 10625ES | 10/100 库拉索 |
| 10×转录缓冲液2 GMP级 | 10670ES | 1/10毫升 |
| 无机焦磷酸酶，GMP级 0.1单位/μL) | 10672ES | 10/100/1000U |
| 小鼠 RNase 抑制剂 GMP 级 | 10621ES | 10/20/100 库 |
| BspQI GMP级 | 10664ES | 500/2500 单位 |
| 脱氧核糖核酸酶 GMP级 | 10611ES | 500/2000/10000 美国 |
| mRNA痘苗加帽酶GMP级 | 10614ES | 2000/10000/100000 美国 |
| mRNA Cap 2'-O-甲基转移酶 GMP 级 | 10612ES | 2000/10000/50000 美国 |
| 10×封盖缓冲液 GMP级 | 10666ES | 1/10毫升 |
| S-腺苷甲硫氨酸（SAM）（32 mM） | 10619ES | 0.5/25/500 毫升 |
| 假尿苷-5-三磷酸，三钠盐溶液（100 mM） | 10650ES | 20 μL/100 μL/1 毫升 |
| N1-Me-Pseudo UTP 钠溶液(100 mM) | 10651ES | 20 μL/100 μL/1 毫升 |
| ATP溶液（100 mM） | 10129ES | 1/25/500 毫升 |
| CTP溶液(100mM) | 10130ES | 1/25/500 毫升 |
| UTP溶液(100mM) | 10131ES | 1/25/500 毫升 |
| GTP 溶液(100 mM) | 10132ES | 1/25/500 毫升 |
| NTP套装溶液（ATP、CTP、UTP、GTP各100mM） | 10133ES | 1 套（4 瓶） |
| Hieff NGS™ RNA 清洁剂 | 12602ES | 1/5/60/450 毫升 |
| ATP Tris 溶液 GMP 级 (100 mM) | 10652ES | 1/5/25/500 毫升 |
| CTP Tris 溶液 GMP 级 (100 mM) | 10653ES | 1/5/25/500 毫升 |
| GTP Tris 溶液 GMP 级 (100 mM) | 10655ES | 1/5/25/500 毫升 |
| 伪 UTP Tris 溶液 GMP 级（100 mM） | 10656ES | 1/5/25/500 毫升 |
| N1-Me-Pseudo UTP Tris 溶液 GMP 级（100 mM） | 10657ES | 1/5/25/500 毫升 |
| ARCA（防反接电容模拟） | 10681ES | 1/5/25/500 毫升 |
| 双链 RNA（dsRNA）ELISA 试剂盒 | 36717ES | 48吨/96吨 |
关于阅读：
用于 mRNA 体外合成的 GMP 级试剂