核酸是一切分子生物学研究的基础,而提取的核酸质量也是决定下游实验成败的关键因素之一。在研发核酸提取试剂时,除了常规的化学成分外,一些小分子核酸或酶可以大大提高提取效率或去除非目标物质的干扰,成为核酸提取中的重要组成部分。
核酸沉淀辅助物质
载体RNA
- 概念与功能 载体RNA
Carrier RNA,中文又称核酸沉淀助剂。在核酸提取过程中,提取所用的离心管多为聚丙烯材质,管壁带有静电,会吸附核酸。在提取纯化过程中使用Carrier RNA,可以帮助核酸去除静电作用,保证核酸能够很好的吸附到纯化柱上,提高洗脱效率,从而达到尽可能高的样品中核酸的回收率。
- 常见的载体RNA类型
Carrier RNA作为核酸沉淀的辅助物质,有多种类型,例如PolyA钾盐、大肠杆菌总RNA、酵母总RNA、tRNA等。
- 使用中常见问题 载体RNA
Carrier RNA 室温放置一段时间后还能使用吗?Carrier RNA 降解会影响使用吗?Carrier RNA 会影响下游实验吗?
Carrier RNA溶解于RNA保护剂中,液态Carrier RNA短时间(7天以内)放置于37℃或室温下影响不大,Carrier RNA本质上是500nt~1000nt范围内的片段,轻微降解不影响正常使用。对于荧光定量PCR等下游应用,Carrier RNA对Ct值无影响。对于NGS等下游应用,可根据实际需要添加。
- 产品介绍 载体RNA
产品名称 | 产品 数字 | 规格 | 储存条件和保质期 |
载体 RNA,6 μg/μL | 19701ES | 1 毫升 / 5 毫升 / 100 毫升 | 储存温度为 -25 至 -15 °C。保质期为 2 年。 |
载体RNA粉末,216 μg/管 | 19703ES | 1 管 / 100 管 / 1000 管 | 室温保存。保质期为2年。 |
19704ES | 1 管 / 100 管 / 1000 管 | 室温保存。保质期为2年。 |
线性丙烯酰胺溶液
- 线性丙烯酰胺溶液的概念及作用
线性丙烯酰胺,英文名称Linear Acrylamide(Linear Polyacrylamide,缩写为LPA),是一种在核酸纯化过程中有助于核酸沉淀的共沉淀剂。
- 线性丙烯酰胺溶液的特性
它是一种中性载体,非生物来源,因此不含潜在的核酸或核酸酶污染。
它不会干扰 A260/A280 读数,也不会抑制聚合酶和限制性内切酶活性。
它与其他后续分子生物学应用(如 PCR 和酶消化)兼容。
可辅助沉淀皮克级以上的DNA、RNA(包括Oligo),可回收的片段长度在20个核苷酸以上,单链、双链核酸均适用。
- 产品介绍
产品名称 | 产品 数字 | 规格 | 储存条件和保质期 |
线性丙烯酰胺溶液(5 mg/mL) | 10408ES | 1 毫升 | 储存于 4 °C。保质期为 3 年。 |
核酸提取辅助酶
核糖核酸酶A
- RNase A的概念和功能
核糖核酸酶A(RNase A)是一种内切核糖核酸酶,可特异性地降解单链RNA上的胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U)残基。核糖核酸酶A(RNase A)最常见的应用是在质粒DNA或基因组DNA制备过程中去除RNA。此外,该产品还可用于RNase保护试验和RNA序列分析等分子生物学实验。
- RNase A 的特征
RNase A来源于牛胰腺,无内切酶和外切酶的污染,无需预热即可直接使用,耐高温环境。
- 产品介绍
产品名称 | 产品 数字 | 规格 | 储存条件和保质期 |
RNase A(100毫克/毫升) | 10406ES | 1 毫升 | 储存于-20°C。保质期为2年。 |
RNase A(10毫克/毫升) | 10405ES | 1毫升 | 室温保存。保质期为 1 年。 |
10407ES | 100毫克/1克 | 室温保存。保质期为2年。 |
脱氧核糖核酸酶 I (DNase I)
脱氧核糖核酸酶 I (DNase I) 是一种存在于各种细胞和组织中的内切核酸酶,它靶向并切割与嘧啶相邻的磷酸二酯键,产生 5' 端带有磷酸基团、3' 端带有羟基的多核苷酸。平均最小消化产物为四核苷酸聚合物。DNase 可以催化各种形式的 DNA,例如单链 DNA、双链 DNA,甚至染色质(其切割率受组蛋白影响)。在分子生物学实验中,它通常用于从蛋白质中去除 DNA 或在 DNA 中引入缺口以将标记碱基插入 DNA。
2.DNase I的特点
DNase I 的最佳工作范围是 pH 7-8,其活性依赖于 Ca2+ 并可被 Co 等二价金属离子激活2+,锰2+, 锌2+等 5 mM Ca2+ 可以保护酶不被水解。在Mg的存在下2+,这种酶可以随机识别并切割 DNA 链上的任何位点;而在 Mn2+,它可以同时识别DNA的两条链,并在几乎相同的位置进行切割。
3.产品介绍
产品名称 | 产品 数字 | 规格 | 储存条件和保质期 |
脱氧核糖核酸酶 I (DNase I),来源于牛胰腺 | 10607ES | 15千单位/10×15千单位 | 储存于-20°C。保质期为2年。 |
脱氧核糖核酸酶 I (DNase I),来源于牛胰腺 | 10608ES | 25 毫克/100 毫克/1 克 | 储存于-20°C。保质期为2年。 |
蛋白酶K
1.蛋白酶K的概念和功能
蛋白酶K(Proteinase K)是一种具有广泛切割活性的丝氨酸蛋白酶,其相对分子量约为29.3kDa,可切割脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基末端肽键。蛋白酶K应用范围广泛,可用于制备染色体DNA用于脉冲场凝胶电泳、Western印迹、去除DNA和RNA制剂中的核酸酶等实验。变性剂如SDS(1%)可增加其活性。
2.蛋白酶K的特点
源自基因重组酵母菌株。
不含 RNase 和 DNase。
在尿素和SDS中活性且稳定。
在较宽的pH值范围内有效(pH 4.0 - 12.0),最佳pH值范围为pH 7.5 - 9.0。
产品名称 | 产品 数字 | 规格 | 储存条件和保质期 |
10401ES | 100毫克/1克/5克/100克 | 储存于 4°C。保质期为 3 年。 | |
蛋白酶K溶液(20mg/mL) | 10412ES | 1毫升/10毫升/25毫升/500毫升 | 储存于 4°C。保质期为 2 年。 |
蛋白酶K溶液(20mg/mL) | 10410ES | 1毫升/10毫升/25毫升/500毫升 | 储存于 4°C。保质期为 2 年。 |
RNA稳定剂
动物和植物组织的RNA稳定剂溶液
1.RNA稳定剂溶液对动植物组织的作用
RNases广泛存在于环境中,极有可能降解新鲜采集的动植物组织、血液、体液等样本中的RNA。RNAsafe动植物组织稳定剂(RNAsafe Tissue Stabilizer)是专门为稳定和保护采集样本中的RNA而开发的。作为一种无毒溶液,它能快速渗透组织并灭活内源性RNases。
2.动植物组织RNA稳定剂溶液特性
操作极其简单:只需将新鲜组织切成适当大小(≤0.5 cm)的组织块,然后将其浸入5至10倍体积的RNAsafe中。
稳定期长:浸润了RNAsafe的组织/细胞可在37°C下保存1天,在室温下保存1周,在4°C下保存4周,在-20°C/-80°C下可长期保存。
广泛的下游兼容性:兼容几乎所有的RNA分离方法,如HieffTM Total RNA Extraction Reagent(产品编号:10606ES60),以及几乎所有的商业化RNA提取试剂盒,包括离心柱提取法和磁珠纯化法。
适用材料广泛:可用于各种动物、植物组织(如脑、心脏、肝脏、胰腺、肾脏、脾脏、睾丸、肌肉、植物茎叶等)的保存,也可用于酵母、组织培养细胞等。
3.产品介绍
产品名称 | 产品 数字 | 规格 | 储存条件和保质期 |
RNAsafe 组织稳定剂 RNAsafe | 10604ES60 | 100 毫升 | 室温保存。保质期为 5 年。 |
相关产品
产品名称 | 产品 数字 | 规格 | 储存条件和保质期 |
溶菌酶 | 10402ES | 5/50 克 | 储存于 -20°C。保质期为 3 年。 |
溶血酶(10 U/μL) | 10403ES | 1500/3000/10000 单位 | 存储于 -20℃。 |
蜗牛酶 | 10404ES | 5/10 克 | 储存于 2-8°C。保质期为 2 年。 |
RNAsafe-ICE | 10605ES | 100 毫升 | 室温保存。保质期为 2 年。 |