核酸定量作为分子生物学最基础的实验之一，直接影响下游实验的结果，核酸定量的准确性至关重要。目前NGS文库定量主要有两种方法：紫外吸收法和荧光染料法。
紫外吸收法是利用分光光度计测量260nm处的吸光度来定量DNA和RNA，并通过计算OD260/OD280比值来估算核酸的纯度，但检测值易受游离核苷酸、盐类、有机物等其他污染物的干扰。
Qubit 荧光定量利用与双链 DNA、单链 DNA、RNA 或蛋白质特异性结合的荧光染料。在特定波长光源的激发下，染料会发出荧光，这种荧光不受样品中可能存在的其他杂质分子的影响。荧光强度与样品中目标分子的浓度成正比。
表1. 主流核酸定量方法比较
| 目标 | 紫外吸收 (纳米滴) | Qubit DNA HS | 量子位 DNA BR | 量子位 RNA | 量子比特 ssDNA |
| 核酸类型 | 脱氧核糖核酸、核糖核酸 | 双链DNA | 双链DNA | 核糖核酸 | 单链DNA、寡核苷酸 |
| 样品浓度（ng/μL） | 2纳克/微升至15微克/微升 | 10 皮克/微升 - 100 纳克/微升 | 0.1 纳克/微升 - 1000 纳克/微升 | 250 皮克/微升-1000 纳克/微升 | 50 皮克/微升 - 200 纳克/微升 |
| 优势 | 更高的定量限 | 特异性好 | 定量范围广 | 对 RNA 具有高度选择性 | 耐受性良好 |
| 限制 | 特异性差 | 使用时避光保存 | 使用时避光保存 | 使用时避光保存 | 特异性较差，且能结合 dsDNA |
紫外吸光度定量和Qubit荧光定量各有优势，可以相互补充。对于常规核酸样本的初步定量，以确定浓度、纯度和污染物的存在，可以选择吸光度定量方法。 量子定量比较适合低浓度的珍贵样本，或者下游实验需要精准定量的实验，比如二代测序、实时定量PCR等。
解决方案 1 dsDNA HS 高灵敏度定量
即用型 dsDNA 定量预混液——1× dsDNA HS 检测试剂盒（适用于 Qubit）®
操作简便：即用型预混料，无需预先混合；
灵敏度高：可检测浓度低至50 pg/μL；
稳定性好：荧光信号可持续3小时，室温保存20天不影响定量的准确性；
A.稳定性极佳：室温储存2周仍保持稳定性（测量值与理论值偏差在10％以内）。
表 2. 不同样品在 4°C 和室温下的稳定性测试与竞争对手的比较
| 定量试剂 | 决定 专注 λDNA含量（ng/μL） | ||||||||||
| 0天 | 1天 | 3D | 7d | 10d | 14d | ||||||
| T* 4℃ | 0.51 | 0.496 | 0.524 | 0.534 | 0.495 | 0.499 | |||||
| | 0.51 | 0.508 | 0.513 | 0.475 | 0.48 | 0.495 | |||||
| | 0.51 | 0.517 | 0.506 | 0.486 | 0.506 | 0.523 | |||||
| 定量试剂 | 决定 专注 小牛gDNA（ng/μL） | ||||||||||
| 0天 | 1天 | 3D | 7d | 10d | 14d | ||||||
| T* 4℃ | 55.3 | 53.5 | 55.40 | 57.9 | 55.8 | 58 | |||||
| | 59.4 | 55.4 | 57.8 | 56.1 | 56.3 | 59.8 | |||||
| | 59 | 55.7 | 61.3 | 58 | 58.7 | 56.1 | |||||
B.灵敏度高，批次间稳定性好
表 3.不同批次稳定性试验
| 乙追击 | 样本 | 长* | | 错误 | ||||
| 浓度1（ng/μL） | 浓度2（ng/μL） | 平均值（ng/μL） | 浓度1（ng/μL） | 浓度2（ng/μL） | 平均值（ng/μL） | |||
| D9801060 | λDNA | 0.3160 | 0.3250 | 0.3205 | 0.320 | 0.320 | 0.320 | 0.16% |
| D8801050 | 0.3310 | 0.3320 | 0.3315 | 0.319 | 0.306 | 0.3125 | 5.73% | |
| D7813110 | 0.345 | 0.358 | 0.352 | 0.334 | 0.329 | 0.332 | -6.03% | |
解决方案 2 dsDNA BR 宽范围定量
广泛范围的 dsDNA 定量分析——dsDNA BR 检测试剂盒
灵敏度高：可检测浓度低至50 pg/μL；
线性好：2-1000ng范围内线性良好；
对污染物耐受力强：能耐受常见的污染物。
表 4. 与竞争产品相比的稳定性和对污染物的耐受性
| | T* 巴西雷亚尔 | ||||||||||
| 标准 | RFU1 | 射频功率放大器 | 平均 | 错误 | 标准 | RFU1 | 射频功率放大器 | 平均 | 错误 | ||
| S1 | 159.63 | 160.71 | 160.17 | 1% | S1 | 216.17 | 211.56 | 213.865 | -2％ | ||
| S2 | 24497.0 | 25078.64 | 24787.82 | 2% | S2 | 20532.46 | 20452.26 | 20492.三十六 | 0％ | ||
| 测定 |
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| 测定 |
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| 污染物 | 10 μL 样品中的浓度 | 浓度1 | 浓度2 | 平均 | 待测试/控制 | 污染物 | 10 μL 样品中的浓度 | 浓度1 | 浓度2 | 平均 | 待测试/控制 |
| 控制（H2哦） | / | 49 | 48.6 | 48.8 | 0.0% | 控制（H2哦） | / | 49.8 | 四十八 | 48.9 | 0.0% |
| 牛血清白蛋白 | 1毫克/毫升 | 51.8 | 52 | 51.9 | 6.4% | 牛血清白蛋白 | 1毫克/毫升 | 54 | 51.2 | 52.6 | 7.6% |
| 乙醇 | 20％ | 44.6 | 四十四 | 44.3 | -9.2％ | 乙醇 | 20％ | 44.8 | 43.4 | 44.1 | -9.8％ |
| 氯仿 | 4.00％ | 49.0 | 49.8 | 49.4 | 1.2％ | 氯仿 | 4.00％ | 50.0 | 四十七 | 48.5 | -0.8％ |
| 十二烷基硫酸钠 | 0.2% | 46.6 | 45.8 | 46.2 | -5.3％ | 十二烷基硫酸钠 | 0.2% | 53.2 | 51.6 | 52.4 | 7.2% |
| Trition-X100 | 0.20% | 41.6 | 40.6 | 41.1 | -15.8％ | Trition-X100 | 0.20％ | 53 | 51 | 52.0 | 6.3% |
| 脱氧核糖核苷酸 | 2毫米 | 44.2 | 四十五 | 44.6 | -8.6％ | 脱氧核糖核苷酸 | 2毫米 | 47.8 | 46.4 | 47.1 | -3.7％ |
解决方案 3 ssDNA 定量
ssDNA定量分析的理想选择—Qubit高性价比ssDNA检测试剂盒®
灵敏度高：可检测浓度低至50 pg/μL；线性优良：0-200ng范围内线性良好；
信号稳定：优异的染料与升级优化的Buffer结合，可在室温下保持稳定的荧光强度，即使在盐、游离核苷酸、溶剂、去污剂或蛋白质等常见污染环境中也具有极强的适用性，确保准确定量；
稳定性好：在4℃或25℃下处理6个月后性能无明显变化；
应用范围广泛：操作过程简单，可快速定量寡核苷酸、引物、变性DNA、单链环状DNA等。
A.重复性好：在不同的Qubit仪器、不同类型的样品中进行定量分析
图1. 不同批次在不同Qubit仪器上的稳定性测试
B.稳定性好：标准品及1×工作液稳定性试验，37℃保存10天，荧光信号稳定。长期稳定性监测，25℃保存6个月，产品性能与4℃对照一致。
表5. 标准品和样品稳定性测试
| 4℃保存 一个月 | 4℃保存 两个月 | 25℃保存 两个月 | 25℃保存 六个月 | |||||||||
| 标准 | 值 1 | 值 2 | 平均值 | 值 1 | 值 2 | 平均的 | 值 1 | 值 2 | 平均值 | 值 1 | 值 2 | 平均的 |
| 标准＃1 | 116.06 | 14.76 | 115.41 | 124.31 | 125.04 | 124.68 | 112.08 | 110.24 | 111.16 | 131.91 | 135.41 | 133.66 |
| 标准＃2 | 18160.57 | 18348.57 | 18254.60 | 21006.58 | 20974.62 | 20990.60 | 19668.22 | 19078.36 | 19373.30 | 22421.78 | 22205.65 | 22313.72 |
| 样本 | 浓度 1 | 浓度 2 | 平均值 | 浓度 1 | 浓度 2 | 平均的 | 浓度 1 | 浓度 2 | 平均值 | 浓度 1 | 浓度 2 | 平均值 |
| 示例 1 | 11.70 | 12.20 | 11.95 | 13.30 | 13.00 | 13.15 | 12.70 | 11.70 | 12.20 | 12.90 | 12.40 | 12.65 |
| 示例 2 | 18.80 | 18.80 | 18.80 | 19.00 | 18.60 | 18.80 | 19.20 | 18.00 | 18.60 | 17.90 | 18.40 | 18.15 |
| 示例 3 | 1.43 | 1.48 | 1.46 | 1.38 | 1.34 | 1.36 | 1.40 | 1.36 | 1.38 | 1.30 | 1.24 | 1.27 |
| 示例 4 | 5.28 | 5.12 | 5.20 | 5.76 | 5.78 | 5.77 | 6.10 | 5.72 | 5.91 | 5.62 | 5.72 | 5.67 |
| 示例 5 | 2.20 | 2.16 | 2.18 | 2.02 | 2.00 | 2.01 | 2.10 | 2.14 | 2.12 | 1.95 | 1.94 | 1.95 |
| 示例 6 | 1.64 | 1.61 | 1.63 | 1.50 | 1.47 | 1.49 | 1.68 | 1.67 | 1.68 | 1.45 | 1.42 | 1.44 |
Yeasen NGS定量产品选择指南
| 产品类别 | 产品 | 目录编号 | 定量范围 |
| 双链DNA高通量 | Qubit 的 dsDNA HS 检测试剂盒® | 12640ES | 0.2-100纳克； 10 皮克/微升 - 100 纳克/微升 |
| Picogreen dsDNA 定量试剂 | 12641ES | ||
| 1×dsDNA HS 检测试剂盒 | 12642ES | ||
| 双链DNA | 双链DNA BR检测试剂盒 | 12643ES | 2-1000纳克； 0.1 纳克/微升 - 1000 纳克/微升 |
| 单链DNA量子比特 | Qubit 的 ssDNA 检测试剂盒® | 12645ES | 1–200ng； 50 皮克/微升 - 200 纳克/微升 |