Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit 是一款专门用于 mRNA 纯化的磁珠试剂盒。mRNA Capture beads 是微米大小的顺磁性微球，偶联有 Oligo dT（poly A）尾巴，可通过与带有 poly A 尾巴的 mRNA 结合，从 10 ng 至 4 μg 完整 RNA 中分离出 mRNA。

规格

成分

贮存

本品应于2～8℃保存，保存期一年，避免冰冻。

指示

1. 未包含所需材料

磁力架、无核酸酶 PCR 管

2. 手术

1) 平衡 mRNA 捕获珠 室温下（约 30 分钟）。

2) 将10 ng – 4 μg总RNA用无核酸酶水稀释至50 μL于无核酸酶PCR管中，置于冰上。

3) 颠倒或涡旋混匀磁珠。将 50 μL 磁珠加入 50 μL 总 RNA 样品中，吹打 6 次混匀。短暂旋转至管底。

4)将磁珠和RNA的混合物放入热循环仪中孵育，运行以下程序：65°C，5分钟；25°C，5分钟；25°C，保持。

5) 将试管放在磁力 架子 5 分钟以将 mRNA 从总 RNA 中分离出来。小心地除去上清液。

6) 从磁力架上取下管子 架子 用 200 μL 的 Beads Wash Buffer 重悬磁珠。用移液器上下吹打整个体积 6 次以彻底混合。将管子放在磁力架上 架子 5 分钟，小心除去上清液。

7）重复步骤6。

8) 从磁力架上取下管子 架子. 加入50 μL Tris Buffer 重悬磁珠，用移液器吹打6次，充分混匀。

9)将样品放入热循环仪中，运行以下程序洗脱mRNA：80°C，2分钟；25°C，保持。

10) 从PCR仪中取出样品，加入50μL Beads Binding Buffer，反复吹打6次，混匀。

11) 室温下孵育 5 分钟，让 mRNA 与磁珠结合。

12） 将管子放在磁性 静置 5 分钟，小心除去上清液。

[注意]：需用10 μL移液器吸出剩余液体。

13） 从磁性 架子，用 200 μL Beads Wash Buffer 重悬磁珠，反复吹打 6 次以充分混匀。将管子放在磁力架上 架子 室温下静置 5 分钟。取出并丢弃所有上清液。

14) mRNA最终洗脱

方案A： 用于保留转录反应

取出管子 来自磁性 架子. 加入12μL无核酸酶水 并反复吹打6次，以充分混匀。 将管放入热循环仪中运行以下程序：80°C，2 分钟。 然后将管子放在磁性 架子 立即室温放置5分钟，待溶液澄清后，小心吸取10 μL上清至另一新的无核酸酶PCR管中。

方案B： 对于 RNA 文库制备

12603套件与12308套件配套使用，具体产品请参考：

Hieff NGS™ Ultima 双模式 mRNA 文库制备试剂盒 -12308ES

根据建库相关试剂盒说明书，加入适当体积的Frag/Primer Buffer。

笔记

1. 为了您的安全和健康，操作时请穿着工作服和戴一次性手套。
2. 仅供研究使用。
3. 使用磁珠前务必预热至室温并混匀，否则可能会影响样品的回收效率。
4. 操作过程中应严格避免RNase和核酸污染。
5. 本品与其他试剂使用时，请按照具体实验说明进行操作。
6. 为了得到良好的纯化效果，需要总RNA具有良好的完整性，并确保RIN值>7.0。