巨噬細胞在身體不同部位發揮獨特而關鍵的作用,然而,為了更好地研究巨噬細胞在特定區域的特定功能及其對疾病發展的影響,精準的巨噬細胞去除已成為關鍵的研究工具。氯膦酸鹽脂質體是經過驗證的、最具成本效益的和最理想的巨噬細胞去除工具之一。氯膦酸鹽脂質體可以透過腹膜內、尾靜脈和其他各種方式給藥,以去除不同組織中的巨噬細胞。
接下來我們將分享一系列主題來展示不同部位巨噬細胞清除的方法和效果,希望為研究人員提供有用的參考和借鏡。
注射方法介紹
尾靜脈注射
尾靜脈注射24小時後達到最大消耗。應注意檢測的時間點。
1.將小鼠放入倒置的便當盒中,從孔口拉出尾巴,有兩個 動脈和三 老鼠尾巴上的靜脈,兩條 尾部背部和腹部有三條動脈, 葉脈分佈呈鋸齒狀,一般利用左、右兩邊葉脈;
2.將紗布浸泡在70℃左右的溫水中(或酒精浸泡),取出後包紮尾部,以達到尾部血管擴張和軟化表皮角質的目的;
3.進行尾部靜脈注射,用左手拇指和食指前後按住大鼠尾部,留出約2cm的一段,使皮膚緊張,靜脈較為飽滿,右手握住1mL針頭注射器,使針頭與靜脈平行(夾角小於30°),從尾部下1/4處插入針頭,開始注射藥物時要緩慢,插入,若沒有阻力,沒有反白,
4.有的實驗需要連續數天重複進行尾靜脈注射,注射部位應盡量從尾端開始,並依序向尾根部移動,並變換血管位置進行注射。拔出針頭後,用棉球按壓注射部位1 - 2分鐘止血。

腹腔注射
腹腔注射 48 小時後達到最大消耗 - 72 小時。應注意檢測時間點。
1.先用背抓法抓住小鼠,使其頭稍後仰、腹部向上,用小指固定小鼠左後肢,再用75%酒精棉球對注射部位進行消毒。
2.小鼠腹腔注射部位為0.5 小腹部正中線兩側各1cm(與大腿根部平齊)。為避免內臟損傷,撈鼠時應將小鼠頭向後仰,以使下腹部的內臟器官向上移動。
3.將注射器針頭刺入皮膚,進入皮膚下,沿皮下方向將針頭向前推2 - 3 mm,然後以針頭與皮膚呈45度角刺入小鼠腹腔。注意:穿透腹膜後,針尖的阻力消失。
4.將針塞拔回,如無回血或回液,即可注射藥物。
5.注射後,輕輕旋轉針頭,然後緩慢拔出注射器,避免液體洩漏。

針對不同的研究部位也會有不同的注射方法,例如:皮下注射、氣管給藥、顱內注射等。實驗前請參考相關文獻並諮詢億森技術團隊。
加藥週期及劑量
短期給藥:單次注射氯磷酸鹽脂質體200 µL (20 - 我們透過在特定時間使用單一或多個巨噬細胞(25 g重量)來檢測巨噬細胞清除效率或用於下游實驗。
長期給藥:需要一週以上才能達到巨噬細胞清除的目的。例如,在野生型小鼠中,200 µL (20 - 25 克重量)通常作為第一劑,然後 200 µL 每2 - 3天一次。
參考測試協議
器官/巨噬細胞 | 劑量(20-25g/只) |
脾臟/紅髓巨噬細胞 | 單劑量:200 µL/小鼠(IV 或 IP)。 |
肝臟/Kuffer 細胞 | 單劑量:200 µL/小鼠(IV 或 IP)。 |
肺/肺泡巨噬細胞 | 靜脈注射(150-200 µL)與氣管內或鼻腔內注射(50 µL)結合可獲得最佳效果。 |
淋巴結 | 注射(100-200 µL)/小鼠,特定給藥方案可參考文獻。 |
大腦/小膠質細胞 | 腦室內進入腦脊髓液,10 µL/小鼠,50 µL/大鼠。 |
血液/單核細胞 | 150-200 µL/小鼠(IV),24 小時內達到最大消耗率,但 1 - 7 天內的最大消耗率取決於菌株。 |
註:以上內容僅供參考,實驗前請查閱相關文獻並諮詢億森技術團隊。
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