一行動原則
潮黴素B是由吸水鏈黴菌代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，透過破壞易位和促進80S核醣體的誤讀來抑制蛋白質合成，從而殺死原核生物和真核細胞。
目前常用此方法來篩選和維持含有潮黴素抗性基因的原核或真核細胞。
2 應用
2.1篩選並維持穩定轉染Hph的原核或真核細胞（植物細胞和哺乳動物細胞）的培養+向量潮黴素 乙 源自大腸桿菌的抗性基因（hyg或hph）。編碼潮黴素B磷酸轉移酶，該酶將潮黴素B轉化為無生物活性的磷酸化產物，從而起解毒作用。
2.2由於作用方式的差異，潮黴素B常與遺傳黴素G418、博來黴素、殺稻瘟菌素S等合併使用，篩選穩定轉染兩種不同載體的細胞株。潮黴素 B 的作用方式與 G418（Cat#60220ES）、博來黴素（Cat#60257ES）不同 和殺稻瘟素（Cat#60218ES），因此非常適合在雙重選擇實驗中與其他選擇性抗生素合併使用。
2.3 抗病毒藥物2.4 作為驅蟲藥，添加到動物飼料中，飼養動物。
2.5 穩定轉染細胞的篩選
用於篩選穩定轉染子的潮黴素B的工作濃度會根據細胞類型、培養基、生長條件和細胞代謝率而變化。建議濃度為50-1000μg/mL。對於首次使用實驗系統，建議透過建立殺滅曲線即劑量反應曲線來確定最佳篩選濃度。一般情況下，哺乳動物細胞，濃度為50-500 μg/mL；對於細菌/植物細胞，為20-200 μg/mL；對於真菌，濃度為200-1000 μg/mL。
3 協議
3.1 儲存溶液的製備（50 mg/mL）
稱取0.5g潮黴素B，加入10mL 1×PBS，pH 7.4。充分溶解後，用0.22μm過濾器過濾除菌。將滅菌後的溶液分裝並儲存於-20℃。
3.2 常用篩選濃度
篩選穩定菌株的潮黴素B的工作濃度依細胞類型、培養基、生長條件和細胞代謝率的不同而不同。建議建立殺滅曲線（劑量反應曲線），首次確定最佳篩選濃度。 一般哺乳動物細胞：50～500μg/mL；細菌/植物細胞：20-200 μg/mL；真菌：300-1000 μg/mL。
3.3 殺滅曲線的建立
【注意】為了篩選穩定細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的最低抗生素濃度。這可以透過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現。至少應安排五種濃度。
1)第1天：將未轉化細胞以20-25％的細胞密度鋪板於適當的培養板中，培養過夜。【註】對於需要更高密度檢測活力的細胞，可以增加接種細胞量。
2）根據細胞類型，設定適當範圍內的濃度梯度。哺乳動物細胞可設定50、100、250、500、750、1000μg/mL。以去離子水或 PBS 緩衝液將潮黴素 B 溶液以 1:10 的比例稀釋至 5 mg/mL。然後按下表將溶液稀釋至相應的工作濃度。
| 最終濃度（μg/mL） | 培養基容量 (mL) | 5mg/mL潮黴素B添加量(mL) |
| 50 | 9.9 | 0.1 |
| 100 | 9.8 | 0.2 |
| 250 | 9.5 | 0.5 |
| 500 | 9.0 | 1.0 |
| 750 | 8.5 | 1.5 |
| 1000 | 8.0 | 2.0 |
3)第2天：更換為新鮮配製的含有相應藥物濃度的培養基。每個濃度製作三個平行樣品。
4）每3-4天更換一次含有藥物的新鮮培養基。
5)以固定週期（例如每2天）進行活細胞計數，以確定適當的濃度，防止未轉染細胞的生長。選擇在理想天數內（一般7-10天）能殺死大多數細胞的最低濃度作為篩選穩定細胞株的工作濃度。
3.4 穩定轉染細胞的篩選
1)轉染48h後，以含有適當濃度（直接或稀釋）潮黴素B的篩選培養基進行傳代培養。 【注意】抗生素對活躍分裂的細胞最有效。如果細胞太密集，抗生素就不會殺死細胞。分裂細胞，使細胞匯合度不超過 25%。
2）每3-4天更換一次篩選培養基。
3) 篩選7天後測量細胞集落形成情形。菌落形成可能需要一周或更長時間，具體取決於宿主細胞類型、轉染和篩選效果。
4)挑取5-10個抗性克隆，轉移至35mm細胞培養板中，在含藥物篩選培養基中培養7天。
5）更換新鮮且不含藥物的培養基進行培養。
4 屬性
潮黴素B為白色至黃棕色粉末，有特殊氣味，易溶於水、甲醇、乙醇等，易與許多有機酸、無機酸生成鹽類。
5 產品儲存
此溶液直接存放於2~8℃，可保存6個月以上。
6 注意
1)轉染hph基因的細胞對潮黴素具有抗性，且轉染細胞穩定或暫時表現此基因。
2)除大腸桿菌外，在其他菌株中也發現了潮黴素B抗性基因（hyg或hph），包括吸水鏈黴菌和肺炎克雷伯菌。
7 產品推薦
| 產品名稱 | 貓＃ | 規格 |
| 潮黴素 B（50 毫克/毫升） | 60224ES03 | 1克（20毫升） |
| 60224ES10 | 10×1克（20毫升） | |
| 潮黴素B | 60225ES03 | 1 克 |
| 60225ES10 | 10克 |
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| 鹽酸大觀黴素 | 60215ES08 | 5克 |
| 腐草黴素（溶液中濃度為 20 mg/mL） | 60217ES20/60 | 20/5×20毫克 |
| 殺稻瘟素 S（殺稻瘟素） | 60218ES10/60 | 10/10×10毫克 |
| 制黴菌素 | 60219ES08 | 5克 |
| G418 硫酸鹽（遺傳黴素） | 60220ES03/08 | 1/5克 |
| 嘌呤黴素（溶液 10 mg/mL） | 60209ES10/50/60/76 | 1×1 /5×1 /10×1 /50×1毫升 |
| 嘌呤黴素二鹽酸鹽 | 60210ES25/60/72/76/80 | 25/100/250/500 毫克 / 1 克 |
| 潮黴素 B（50 毫克/毫升） | 60224ES03 | 1克（20毫升）/10×1克（20毫升） |
| 潮黴素B | 60225ES03/10 | 1/10克 |
| 紅黴素 | 60228ES08/25 | 5/25克 |
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| 金黃色葡萄球菌素 A (AbA) | 60231ES03/08/10 | 1/5×1/10×1毫克 |
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