嘌呤黴素 是由白黑鏈黴菌產生的一種氨基糖苷類抗生素。它是氨酰基-tRNA分子3’端的類似物，能與核醣體的A位結合，摻入延伸的肽鏈中，破壞核醣體上的肽易位，導致翻譯過程中鏈過早終止，從而抑制蛋白質的合成。
圖1 嘌呤黴素（CAS NO.53-79-2）結構式
pac 基因編碼嘌呤黴素 N-乙醯轉移酶 (pac)，存在於產生嘌呤黴素的細菌白黑鏈黴菌中，可賦予其對嘌呤黴素的抗性。這項特性目前被廣泛用於篩選攜帶pac基因質粒的哺乳動物穩定轉染細胞系。嘌呤黴素在穩定細胞株篩選中的廣泛應用與慢病毒載體的特性有關，商業化的慢病毒載體中大多攜帶pac基因。在某些特定情況下，嘌呤黴素也可用於篩選轉化了攜帶pac基因的質粒的大腸桿菌菌株。嘌呤黴素作用迅速，低濃度即可迅速導致細胞死亡。黏附哺乳動物細胞對 2-5 µg/mL 的濃度敏感 嘌呤黴素，而懸浮細胞對低至 0.5-2 µg/mL 的嘌呤黴素濃度就已經很敏感了。一週之內即可產生對嘌呤黴素具有穩定抗性的哺乳動物細胞。
穩定細胞系篩選
實驗原理
透過將外源性DNA/shRNA克隆到攜帶pac基因的載體中，重組載體轉染到宿主細胞中並整合到其染色體上，隨細胞分裂而穩定傳遞，最後用嘌呤黴素進行篩選。
準備和預實驗
1 建議使用濃度
哺乳動物細胞：1-10 μg/mL，最佳濃度需預先實驗確定。
大腸桿菌：在 LB 瓊脂培養基上篩選出攜帶 pac 基因的穩定轉殖大腸桿菌，使用濃度為 125 μg/mL。大腸桿菌穩定轉化子的嘌呤黴素篩選需要精確的 pH 調節。
2 溶解方法
將嘌呤黴素溶於蒸餾水中，製成50 mg/mL的原液，用0.22 μm濾膜過濾除菌，分裝，-20°C保存。
3 嘌呤黴素殺傷曲線測定（以shRNA轉染或慢病毒轉導為例）
嘌呤黴素的有效篩選濃度與細胞種類、生長狀態、細胞密度、細胞代謝、細胞週期位置有關。確定殺死未轉染細胞的嘌呤黴素最低濃度至關重要。對於第一次實驗，必須進行嘌呤黴素梯度篩選預實驗，以建立殺滅曲線。
- 接種密度為5~8×104將 24 孔板中的每孔細胞放入培養箱中並培養過夜。
- 製備篩選培養基：含有不同濃度嘌呤黴素（例如0-15μg/mL，至少5個梯度）的新鮮培養基。
- 換上新鮮配製的篩選培養基，繼續培養，觀察細胞生長狀況，每2-3天更換新鮮的篩選培養基。
- 每天觀察細胞存活率； 4-6天內有效殺死所有未轉染細胞的藥物濃度為最低濃度。
穩定轉染子的篩選
- 慢病毒感染48-72h（70-80％匯合度）後，在含有適當濃度嘌呤黴素的培養基中培養細胞至少48h。當未轉染嘌呤黴素的對照組細胞全數死亡時，病毒感染組剩餘的細胞全部為陽性細胞。
【註】：①當細胞處於活躍分裂期，抗生素的作用最為明顯。如果細胞過於密集，抗生素的功效就會大大降低。細胞密度不得超過25%。 ②每日觀察細胞生長狀況；嘌呤黴素篩選至少需要48小時，嘌呤黴素篩選的有效濃度通常可持續3至10天。病毒的MOI越高，每個細胞所包含的shRNA和嘌呤黴素抗性基因的拷貝數就越多。在進行嘌呤黴素篩選時，MOI越高，細胞含有的pac拷貝數越多，可耐受的嘌呤黴素濃度越高。調節嘌呤黴素濃度來篩選轉染細胞，但嘌呤黴素濃度不能低於殺傷曲線的最低有效濃度；
- 加入含最低濃度Puromycin的培養基擴增細胞，qPCR檢測結果符合資格後進行冷凍儲存。
| 產品s 姓名 | 貓＃ | 規格 | 外貌 |
| 嘌呤黴素 二鹽酸鹽 CAS：58-58-2 | 60210ES25 | 25 毫克 | 白色至類白色粉末 |
| 60210ES60 | 100毫克 | ||
| 60210ES72 | 250毫克 | ||
| 60210ES76 | 500 毫克 | ||
| 60210ES80 | 1 克 | ||
| 嘌呤黴素 （溶液 10 毫克/毫升） CAS：58-58-2 | 60209ES10 | 1×1毫升 | 溶液（10 mg/mL於H2中）2（哦） |
| 60209ES50 | 5×1毫升 | ||
| 60209ES60 | 10×1毫升 | ||
| 60209ES76 | 50×1毫升 |
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