1 殺稻瘟素S的作用機制
殺稻瘟素S 是從灰色產色鏈黴菌中提取的一種核苷類抗生素,透過幹擾核醣體中肽鍵的形成,特異性地抑制原核生物和真核生物的蛋白質合成。其作用機轉包括阻斷釋放因子誘導的肽基-tRNA水解,增強tRNA與核醣體大亞基的結合,從而在一定程度上抑制肽鍵的形成。
殺稻瘟素 S 具有快速且有效的作用方式,極低的抗生素濃度即可導致細胞快速死亡。它不僅對細菌和真核生物的蛋白質合成有明顯的抑製作用,對真菌、線蟲和腫瘤細胞也有活性。 Pltocidin S 常用於篩選攜帶 bsr 或 BSD 基因的轉染細胞。
2 殺稻瘟素S的應用
2.1 細胞培養與篩選
- 哺乳動物細胞:blast S常用來篩選攜帶bsr或BSD基因的轉染細胞。這些抗性基因分別來自蠟狀芽孢桿菌和曲霉菌,能夠將滅蟲素轉化為無毒衍生物,從而能夠選擇性殺死不攜帶抗性基因的細胞,哺乳動物細胞中殺稻瘟素 S 的工作濃度範圍為 1 至 50 μg/mL。
碳艾爾 | 格埃努斯 | 哦組織 | 碳培養基 | 殺稻瘟素S濃度(μg/mL) |
海拉 | 人類 | 子宮 | 培養基 | 3-10 |
HEK293 | 人類 | 腎 | 培養基 | 3-10 |
B16 | 老鼠 | 黑色素瘤 | 遠端管理資訊系統 | 3-10 |
個人電腦1.0 | 倉鼠 | 腺癌 | 遠端管理資訊系統 | 10-30 |
膽固醇 | 倉鼠 | 子房 | 培養基 | 5-15 |
- 細菌選擇:在細菌培養中,建議濃度25-100µg/mL,可快速導致不含抗性基因的細胞死亡。
大腸桿菌對殺稻瘟菌素S的敏感性稍低,但轉化子對殺稻瘟菌素S有耐受性,可在50-100 μg/mL殺稻瘟菌素S濃度範圍內用低鹽LB培養基(pH 8)進行篩選,高pH可提高殺稻瘟菌素S活性。
- 植物細胞:也適用於植物細胞內的基因轉殖實驗,bsr和BSD常作為篩選標記。
2.2 蛋白質合成研究
- 殺稻瘟素用於在肽鍵形成層面上研究蛋白質合成過程,特別是在 TLR-2 構建體的 HEK293-T 細胞和 HEK-D5 細胞中。
2.3 抗真菌特性
- 它也具有一定的抑菌活性,可用於水稻稻瘟病的防治。其殺菌作用主要是影響蛋白質的合成,並能抑制孢子萌發、菌絲發育及孢子形成。
2.4 其他應用
- 殺稻瘟素也被用來研究其對腫瘤細胞的抑製作用。
- 它也可作為含有抗性基因 bls、bsr 或 BSD 的轉化細胞的選擇劑。
3 與殺稻瘟菌素S相關的實驗步驟(哺乳類穩定轉染子的篩選)
1) Blasticidin S 的典型使用濃度為 10 μg/mL。以攜帶 bsr 或 BSD 基因的質粒轉染細胞,並在含有殺稻瘟素 S 的正常生長培養基中孵育,以選擇穩定的轉染子。
2) 轉染48小時後,以含有適當濃度Blasticidin S的新鮮培養基傳代細胞(注意:抗生素在細胞處於活躍分裂期時效果最佳,細胞密度過高時抗生素效果會降低,分裂細胞時匯合度不要超過25%)。
3) 每3-4天,移除用過的培養基並添加含有抗生素的新鮮培養基。
4) 7天后,檢查細胞集落的形成。根據宿主細胞類型和轉染/選擇效率,菌落形成可能需要一周或更長時間。
5)將5-10個抗性克隆轉移到35毫米細胞培養皿中,並在選擇培養基中維持7天。隨後,進行細胞毒性試驗測試。
4 產品推薦
產品名稱 | 貓# | 規格 | 外貌 |
殺稻瘟素S CAS:3513-03-9 | 60218ES10 | 10 毫克 | 溶液(10 mg/mL,於HEPES中) 緩衝液,pH 7.5) |
60218ES50 | 5×10 毫克 | ||
60218ES60 | 10×10 毫克 | ||
60218ES80 | 1 克 | 粉末(使用時以無菌水或緩衝液配製成5-10 mg/mL的原液) |
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[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y. 透過抑制 FACT 複合物靶向尤文氏肉瘤中的致癌驅動基因 EWSR1::FLI1 進行治療。致癌基因。 2023年1月;42(1):11-25。 doi: 10.1038/s41388-022-02533-1。 Epub 2022 年 11 月 10 日。 (如果:8.0)
[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. SMAD9-MYCN正回饋迴路代表MYCN擴增神經母細胞瘤的獨特依賴性。 J Exp Clin Cancer Res. 2022 年 12 月 20 日;41(1):352。 doi: 10.1186/s13046-022-02563-3。 PMID:36539767; PMCID:PMC9764568。(如果:11.3)
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四環素 HCl 四環素鹽酸鹽 (USP) | 60212ES25/60 | 25/100克 |
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殺稻瘟素 S(殺稻瘟素) | 60218ES10/60 | 10/10×10毫克 |
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G418 硫酸鹽(遺傳黴素) | 60220ES03/08 | 1/5克 |
嘌呤黴素(溶液 10 mg/mL) | 60209ES10/50/60/76 | 1×1 /5×1 /10×1 /50×1毫升 |
嘌呤黴素二鹽酸鹽 | 60210ES25/60/72/76/80 | 25/100/250/500 毫克 / 1 克 |
潮黴素 B(50 毫克/毫升) | 60224ES03 | 1克(20毫升)/10×1克(20毫升) |
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