快速PNGASE F，僅在10分鐘內完成脫糖基化

隨著糖蛋白質體學和抗體藥物研究的快速發展，糖基化修飾也受到廣泛關注。細胞與細胞、細胞與病原體之間的接觸主要透過糖和蛋白質的相互作用來完成，而糖基化決定了糖複合物的黏附性質。在 IgG 中，Fc 區 Asn297 處保守的 N 連接糖基化對其活性也至關重要。此外，部分抗體還具有額外的N-糖鏈，這些糖鏈與Fc區Asn297處的保守位點一起影響抗體的辨識、半衰期和免疫反應。

蛋白質糖基化是一種複雜的翻譯後修飾，涉及蛋白質特定位點的糖鏈連接。依糖鏈類型不同，糖蛋白分為N連接糖蛋白、O連接糖蛋白等；另外，蛋白質糖基化也受到宿主細胞類型和發酵條件（如培養基、pH值、溫度等）的影響。因此，糖蛋白通常具有糖基化模式的異質性，包括糖基化位點、糖基化水平以及糖鏈的具體結構，使糖鏈分析和結構表徵工作極具挑戰性。為了獲得最大量的糖鏈結構訊息，糖鏈分析的主要策略是首先從蛋白質中釋放出糖鏈，然後進行詳細的分析和表徵。在該策略中，高效、準確、穩定的去糖基化方法至關重要。

目前，酵素法被廣泛用於去糖基化。

依糖鏈類型，糖蛋白可分為N連接糖肽和O連接糖肽。對於N-連接糖肽，常用的酵素包括勝肽N-糖苷酶F（PNGase F）、內切糖苷酶H（Endo H）和內切糖苷酶S（Endo S）。 PNGase F 水解 GlcNAc-Asn 鍵並可去除高甘露糖、複雜和混合聚醣鏈。 Endo H 可裂解 N-聚醣鏈五醣核心內的糖苷鍵。 Endo S 特異性地從天然 IgG 重鏈的殼二糖核心中裂解出 N 連接聚醣。

圖 1. PNGase F、Endo H 和 Endo S 的切割位點。

其中，PNGase F 是去除幾乎所有N-連接 糖蛋白中的寡糖，可裂解由天門冬胺酸連接的高甘露糖、混合糖、複合糖蛋白，特別是去除N連接的聚醣。酵素切位點為：最內層的N-乙醯葡萄糖胺（GlcNAc）與天門冬胺酸殘基之間的醯胺鍵，而酵素解後將蛋白質上的天門冬胺酸轉化為天門冬胺酸。

當α1-6岩藻糖位於GlcNAc核心時，PNGase F也能進行切割；只有當α1-3岩藻糖位於GlcNAc核心（常見於植物和昆蟲糖蛋白中）時，PNGase F才無法切割。

然而傳統的PNGase F酶促反應需要數小時才能釋放抗體的N-糖，並且由於對糖釋放的偏好，去糖基化不完全可能導致結果出現偏差，所得到的糖分佈可能無法代表治療性抗體的正確組成。因此，盡快獲得準確的N-糖譜對於抗體、抗體融合蛋白和其他生物療法藥物生產過程中的糖基化監測至關重要。

快速 PNGase F

Fast PNGase F 是一種優化的重組試劑，可在幾分鐘內快速、徹底地對抗體、免疫球蛋白、融合蛋白和其他糖蛋白進行去糖基化。此酵素可以快速、無偏好地去除所有N-糖，可直接用於下游色譜或質譜分析。 Yeasen 快速PNGase F，N-糖苷酶F（快速版）簡化了實驗流程，減少了實驗時間，同時確保了靈敏度和重複性。

產品特性：

快速地： 幾分鐘內完成並快速去糖基化。

高純度： 無蛋白酶、糖苷酶污染，純度≥95%。

非選擇性： 快速且無偏好地去除所有 N-聚醣。

良好的兼容性： 直接用於下游色譜或質譜分析。

測試數據：

一步蛋白質去糖基化：

1. 10 ug 底物/100 ug 抗體和 ddH2O 混合至總體積為 16 uL；
2. 加入4 μL Fast PNGase F Buffer（5x），最終體積20 uL；
3. 加入 1 μL Fast PNGase F。
4. 在 50°C 下孵育 10 分鐘。

1：蛋白質標記物Cat#20350ES) 2：競爭物 + 底物或抗體 3：競爭物 + 底物或抗體 4： Yeasen 快速 PNGase F 5： Yeasen 快速PNGase F6：底物或抗體7： Yeasen Fast PNGase F 8：競爭對手

兩步驟蛋白質去糖基化：

1. 10 ug 底物/100 ug 抗體和 ddH2O 混合至總體積為 16 uL；
2. 加入4 μL Fast PNGase F Buffer（5x），最終體積20 uL；
3. 在 80°C 下孵育 2 分鐘，冷卻至室溫。
4. 加入 1 μL Fast PNGase F。
5. 在 50°C 下孵育 10 分鐘。

圖3. 兩步驟酶切效果 對蛋白質底物（A）和抗體（B）的影響。

1：蛋白質標記物Cat#20350ES) 2：競爭物 + 底物或抗體 3：競爭物 + 底物或抗體 4： Yeasen 快速 PNGase F 5： Yeasen 快速PNGase F6：底物或抗體7： Yeasen Fast PNGase F 8：競爭對手

結論：

1. Yeasen Fast PNGase F在同等反應條件下，酶切效率與進口競爭對手相當或更高；
2. 建議進行兩步驟酶切以確保更高的酶切效率。有些抗體（如 Fab N-糖基化）需要預熱步驟

以實現有效的去糖基化。

此外， Yeasen 同時也提供常規的PNGase F(Cat#20407ES，比活100000 U/mL)，以及其他類型的糖苷酶，如Endo H糖苷酶H(Cat#20414ES)、Endo S糖苷酶S(Cat#20413ES)。

購買指南

產品編號	20406ES	20407ES	20414ES	20413ES
產品名稱	快速地 PNG酶F	PNG酶F	遠藤	恩多
來源	酵母重組表達	酵母重組表達	酵母重組表達	大腸桿菌 重組表達
具體活動	不適用	10萬單位/毫升	100萬單位/毫升	8000單位/毫克
切割位點	幾乎所有的 N 連接聚醣	幾乎所有的 N 連接聚醣	N-連接高甘露糖聚醣	在 IgG 重鏈的核心二糖結構內進行切割
消化時間	10 分鐘	1-3小時	1-3小時	1 小時
糖基化	合適的	合適的	合適的	合適的
蛋白質結構	合適的	合適的	合適的	合適的

訂購資訊

產品名稱	產品編號	規格
快速 PNGase F（無甘油）	20406ES20/50	20噸/50噸
PNG酶F	20407ES01/02	15000 單位 /75000 單位
遠藤	20414ES92/97	10000單位 /50000單位
恩多	20413ES80/90	1000單位/5×1000單位