- RT-qPCR 採用高效率反向 轉錄酶

逆轉錄酶(RT酶)是一種能夠將RNA模板轉化為互補DNA(cDNA)的酵素。在分子生物學研究中,逆轉錄酶被廣泛應用,特別是在分子診斷領域中發揮不可或缺的作用。透過逆轉錄過程,病毒的 RNA 基因組可以轉化為 cDNA,然後可以使用 qPCR 等技術進行擴增和檢測。這項特性使得能夠準確診斷 RNA 病毒,例如 HIV、甲型流感和乙型流感。

圖1. 逆轉錄過程示意圖

追求更快速、更靈敏、更容易操作的RT-qPCR分子診斷試劑成為當前主要的發展趨勢。逆轉錄酶作為RT-qPCR過程中的關鍵原料之一,需要有更快的逆轉錄速度、更高的合成產量以及更好的耐熱性。為了獲得更適合RT-qPCR的逆轉錄酶, Yeasen 開發了 Hifair商標 我在M-MLV基礎上經由基因改造而來的系列逆轉錄酶,具有更低的RNase H活性、更高的熱穩定性、更強的連續合成能力。

圖 2. 逆轉錄作用示意圖

海法逆轉錄酶

Yeasen 有各種Hifair商標 逆轉錄酶,並可以提供多種產品形式,包括酶和預混劑,您可以根據實際需求進行選擇。下表列出了不同產品的特色及建議用途 Yeasen 逆轉錄酶。

表 1 選擇指南 希菲爾 逆轉錄酶

產品名稱(產品編號

產品功能

建議應用

海法商標 三、逆轉 轉錄酶 (11111ES)

熱穩定性(高達 65°C),適用於複雜模板

RT-LAMP

海法商標 反向

轉錄酶 (11300ES)

相容性強、速度快、合成產率高

一步到位 RT-PCR/定量PCR

注意:以上提到的所有酵素均有高濃度或無甘油配方。

現在我們重點介紹一種用於 RT-qPCR 分子診斷試劑的逆轉錄酶:Hifair商標 V 逆轉錄酶。此酵素相容性強、速度快、合成產率高,可承受高達58°C的反應溫度。它特別適合RT-qPCR分子診斷試劑的開發。

海菲爾性能演示V逆轉錄酶

1.可承受58℃反應溫度,適合複雜RNA模板的逆轉錄

    圖 3. Hifair 的逆轉錄酶商標 將V逆轉錄酶和品牌T*分別在55℃和58℃孵育30分鐘,檢測殘留酵素活力。結果表明,Hifair商標 V逆轉錄酶在58℃孵育30分鐘後仍能維持70%的活性,遠高於品牌T*。

    2.RT-qPCR檢測率優於其他品牌和 t檢測範圍為1 pg-1 μg

    圖4.以1 pg-1 μg(7個梯度)293T細胞總RNA為模板,以Hifair進行逆轉錄商標 V 一步式 RT-gDNA 消化 SuperMix 用於 qPCR(Cat#11142),V*,T*。利用qPCR對所得的cDNA進行定量分析。結果表明,11142ES的靈敏度可達1pg,優於其他品牌。

    逆轉錄酶突變體文庫 Yeasen

    Yeasen 繼續推動逆轉錄酶的進化 和 它的 ZymeEditor商標 平台。目前我們已篩選出多種在不同應用領域表現優異的逆轉錄酶突變體,可以充分滿足不同客戶群在多樣化應用領域的需求。

    表 2 逆轉錄酶突變體選擇指南Yeasen

    推薦產品

    產品分類

    產品名稱

    目錄編號

    高效PCR酶系列

    Hieff UNICON™ Hotstart E-Taq DNA 聚合酶,5 U/μL

    10726ES

    Hifair™ V 逆轉錄酶(200 U/μL)

    11300ES

    尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDG/UNG),1 U/μL

    14455ES

    小鼠 RNase 抑制劑 (40 U/µL)

    10603ES

    dNTP 混合物(各 25 mM)

    10125ES

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