非洲豬瘟病毒 - 總主混合物/直接擴增 qPCR 解決方案

非洲豬瘟(ASF)是由非洲豬瘟病毒(ASFV)感染家豬或野豬引起的急性、重度、高度傳染性的傳染病。其發病率和死亡率可達100%,嚴重危害全球養豬業,造成難以估量的經濟損失。世界動物衛生組織(OIE)將其列為應通報的動物疾病。

目前,非洲豬瘟尚無疫苗和有效治療方法。透過實驗室診斷方法快速且準確地診斷非洲豬瘟對於防止疾病傳播至關重要。 OIE 建議將 qPCR 作為 ASF 常規診斷的主要工具。

Yeasen 是一家擁有豐富IVD原料研發經驗的製造商。面對非洲豬瘟, Yeasen 積極回應,配合客戶制定了非洲豬瘟病毒從提取到檢測三大全流程解決方案。那麼,三種解決方案是什麼?這些解決方案的應用是什麼?繼續閱讀...

圖 1. Yeasen 非洲豬瘟檢測解決方案

解決方案 I:TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG plus)詢問

YeasenTaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG plus)(Cat#13171)是針對 ASFV 檢測優化的主混合物,含有酵素混合物、Mg2+、dNTP 和緩衝液。主混合物用於擴增步驟,透過添加引子和探針配置為預混合溶液。此預混液設計有可有效抑制非特異性PCR擴增的因素,可將擴增效率提高至4重。

產品特性

👍UDG防污染系統,有效防範氣溶膠污染風險

👍預混PCR溶液(master mix+引子+探針)在室溫下長期穩定,大大簡化了檢測難度

👍擴增效率高、重複性佳

👍適用於多平台、多系統

案例展示

👉預混PCR溶液的長期穩定性
使用Cat#13171配置在ASF質粒系統擴增中可37℃放置7天,並反覆凍融15次的預混PCR溶液。結果顯示PCR溶液在37℃放置7天後Ct值及靈敏度無明顯變化,重複凍融15次後Ct值無明顯變化。

圖 2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(查詢)用於ASF質粒體系擴增的預混PCR溶液中具有長期穩定性。 2A-37℃ 0天和7天的Ct值 2B-37℃ 0天和7天的靈敏度 2C-15次凍融後的穩定性

👉穩定且可重複的試劑
選取四個不同批次的Cat#13171重複20次ASFV質粒系統擴增實驗。 Ct值沒有顯著差異,CV小於1%。

圖 3.重複性測試 Yeasen 貓號#13171

👉多平台多系統適用
Yeasen 使用Cat#13171分別在Bio-Rad CFX96、ABI Q5和Slan平台上擴增非洲豬瘟ASFV/ACT雙質粒。可以看出 Yeasen Cat#13171適用於各種型號的儀器,數據可靠且穩定。

圖 4. Bio-Rad CFX96 實時 PCR 系統


圖 5. ABI Q5 實時 PCR 系統

圖 6. Slan 實時 PCR 系統

解決方案二:通用 TaqMan 多重 qPCR 預混液

Yeasen的通用 TaqMan 多重 qPCR 主混合物(Cat#11211)經過深度優化,可使用抗體修飾的熱啟動 Taq DNA 聚合酶和匹配的多重緩衝液有效擴增低濃度模板。本產品支持單管最多4重PCR反應,是基因分型和多重qPCR分析的理想選擇。

產品特性

👍對血液雜質耐受性強,可與 Yeasen 核酸萃取試劑 Cat#13720 核酸釋放試劑 V2,適用於直接 qPCR
👍超高靈敏度達3份/反應,大幅提升檢測準確率
👍預混PCR溶液(Master Mix+引子+探針)在室溫下長期穩定,大大簡化了檢測難度

案例展示

👉對血液雜質耐受性強
與其他品牌的同類產品相比, Yeasen Cat#11211 對血液樣本中的抑制劑具有更高的耐受性。結果表明 Yeasen Cat#11211 對 EDTA 和檸檬酸鈉有很高的耐受性,並能承受 0.5% 的全血。

圖 7. Cat#11211 通用 TaqMan 多重 qPCR 預混液 和不同品牌的主混合物用於 ASF qPCR 溶液,分別補充 3 mM EDTA(3A)、6 mM 檸檬酸鈉(3B)、0.5% 血液(3C)。

👉超高靈敏度,3 份/反應

針對不同品牌的產品進行了20次重複的ASFV質粒擴增。實驗結果表明 Yeasen 產品較高。

圖8. 不同品牌同類產品偵測率對比(最終系統中有3份拷貝)

👉長期穩定性,常溫下可穩定7天

ASFV/ACT雙質粒系統PCR溶液在4℃、25℃、37℃條件下放置7天後仍能維持穩定性能。可以看出Ct值和螢光值沒有明顯變化。

圖9. PCR溶液的穩定性

解決方案三: 等溫擴增

Yeasen的產品支援等溫擴增技術,有助於更快、更有效地進行 ASF 檢測。 Cat# 14402 Hieff™ Bst Plus DNA 聚合酶(40 U/μL) 源自嗜熱土芽孢桿菌 DNA 聚合酶 I,缺乏 5'-3' 外切酶活性。本產品具有更強的5'-3'DNA聚合酶活性、鏈置換活性及dUTP耐受性,更適合抗污染的等溫擴增反應,如LAMP、CPA等。

產品特性

👍擴增效率高

👍高產量擴增

👍dUTP 耐受性,可與 Cat#10303 尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDG/UNG) 結合使用(查詢),熱不穩定,1 U/μL,以防止氣溶膠污染的風險

案例展示

👉進口品牌 N* 產品的更優質替代品

擴增過程使用來自 Yeasen 和N*公司。不同品牌之間的Ct值和螢光強度無明顯差異。

圖10. 不同品牌的擴增曲線

訂購產品

Yeasen 針對上述三種解決方案,提供了多種用於檢測ASFV的產品。所述產品及相關產品列於下表。請根據您的需求選擇合適的檢測方法和最佳的產品。

類別

產品描述

產品名稱

庫存單位

萃取

磁珠擷取

核酸釋放試劑V2(查詢

13720ES

qPCR 混合物

預混料穩定

Hieff Unicon™ TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(查詢

13171ES

高靈敏度

Hieff Unicon™ 通用 TaqMan 多重 qPCR 預混液

11211ES

酵素及抗體

塔克

Hieff UNICON™ HotStart Direct Taq DNA 聚合酶(查詢

10717ES

Taq抗體

Hieff™ 雙阻斷抗 Taq DNA 聚合酶抗體

31303ES

布施

Hieff™ Bst Plus DNA 聚合酶(40 U/μL)

14402ES

Hieff™ Bst Plus DNA 聚合酶(2000 U/μL)(查詢

14403ES

聯合發展集團

尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG),不耐熱(查詢

10303ES

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