您還在為多片段或超長片段同源重組效率低、菌落數量少而煩惱嗎?

還是因載體或片段較珍貴,產量較低,為了節省原料,採用小體系低濃度連接,但為連接效率低而苦惱?

Yeasen 產品: 顯著提高,低濃度、小系統及超長片段的連接效率,高陽性克隆率,幫您輕鬆完成 結紮

一步法克隆與傳統酵素切克隆方法的比較

方法

插入片段準備

限制性位點的限制

通用屬性

連線時間

陽性率

一步快速重組克隆技術

步驟 1 淨化

沒有任何

★★★★★

最快時間為 5 分鐘

高達 95%

限制消化和連接克隆技術

第 2 步淨化

是的

★★

過夜

不同基因差異很大

產品優勢

方向: 1-7 DNA片段的一步克隆。

簡單:一個管內可以連接多個片段。

快速:最快連線只需5分鐘。

效率高:陽性克隆率高。

系統小:整個連接系統可低至 6 μL。

超長:連接長度超過 25 kb(載體+片段長度)。

表現 展示

  • 單片段高效率重組6μL小系統

圖 1 10 ng 低輸入單片段 被結紮 6 μL小系統非復甦受體細胞狀態。結果顯示10923ES性能優於競爭產品,連接效率高,菌落較多,陽性率達100%。 AB: 重構轉換板。載體(10 kb)與插入片段(1 kb)的摩爾比為1:2。 C:插入片段的PCR鑑定。米: Yeasen 10505ES。載體體積:40 ng/6 μL反應體系,反應條件:50℃,15 min。

  • 多片段高效重組

圖 2 六個片段(7.6 kb)已連接。 結果顯示10923ES性能優於競爭產品,菌落數較多,陽性率達100%。 AB: 重構轉換板。載體(11.6 kb)與插入片段(7.6 kb)的摩爾比為1:2。 C:插入片段的PCR鑑定。米: Yeasen 10505ES,PCR長度2.6kb。載體體積:200ng/20μL反應體系,反應條件:50℃,50min。

  • 低濃度多片段高效重組

圖 3 分別連接低濃度的五個和六個片段。 結果顯示,10923ES在低濃度下表現出穩定的連接性,細菌數量較高,陽性率為100%。 AB:重組轉化板。 CD:插入片段PCR鑑定電泳圖,M: Yeasen 10505ES,PCR長度2.6kb。

  • 試劑穩定性

圖 4 37℃放置7天後結果顯示,10923ES在低濃度下仍能穩定連接5個和6個片段。 AF:重組轉化板。 GH:插入片段PCR鑑定電泳圖,M: Yeasen 10505ES,PCR長度2.6kb。

客戶案例

  • 高效率重組小型系統

圖 5 10923ES 連接到 10 μL小反應體系,陽性率100%。答:重新配製轉換板。 B:插入片段的PCR鑑定。載體大小:5,631 bp;目標片段大小:1,384 bp。

圖 6 10 μL小系統單片段連接及點突變克隆,陽性率100%。 A&C:重組轉化板。 B:插入片段PCR鑑定,1-5泳道分別為菌落1、菌落2、陰性對照、陽性對照(基因組為模板)、陽性對照(PCR純化片段為模板)。 D:插入片段PCR鑑定電泳圖。

  • 低濃度短片段高效重組

圖 7 10923ES 連接 低濃度碎片。與競品相比,菌落數較高,陽性率(10/11)>90.9%。 AB: 重構轉換板。 C:插入片段的PCR鑑定。載體大小:3,000 bp;目標片段大小:441 bp。

  • 高效快速的多段連接

圖。8.10923ES四段連接,高GC、短段組合連接,相較於S牌號,10923ES含菌量較高,陽性率達100%。 D:重組轉化片。 E:插入片段定序辨識圖譜。 F:Sanger定序確認載體與片段連接成功,且連接位點定序正確。

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