瓊脂糖是從瓊脂或含瓊脂的海藻中提取的純化的線性半乳聚醣親水膠體。從結構上看,它是一種由 β-D-吡喃半乳糖基 (1-4) 與 3,6-脫水-α-L-吡喃半乳糖基殘基連接的線性聚合物。作為凝膠試劑,它通常用於透過凝膠電泳或印跡方法(如Northern或Southern)進行常規核酸分析,也適用於蛋白質應用,例如徑向免疫擴散(RID)實驗。
瓊脂糖凝膠電泳是利用瓊脂糖作為支撐介質的電泳方法,包括凝膠製備、上樣、電泳等步驟。其分析原理與其他支撐物電泳的主要區別在於,它具有「分子篩」和「電泳」的雙重作用。當將凝膠置於電場中時,帶電的核酸會透過凝膠孔向正極遷移。經過不同條件下電泳適當時間後,不同大小、不同構象的核酸片段會位於凝膠中的不同位置,進而達到分離。

圖1 核酸電泳實驗操作步驟

圖2 電泳遷移方向圖

如何選擇正確的瓊脂糖?

根據瓊脂糖的基本參數判斷:

  • 硫酸鹽含量-純度指標;
  • 凝膠強度-破壞凝膠所需的外力;
  • 凝膠點-水溶性瓊脂糖溶液冷卻時形成凝膠的溫度;
  • 電滲透(EEO)-一種液體滲透凝膠的電動運動。瓊脂糖凝膠內的陰離子基團吸附到基質上,不會遷移,但解離出來的陽離子會向負極遷移,產生電滲。由於樣品的電泳遷移通常向正極移動,EEO引起的內部對流會幹擾分離效率。基於瓊脂糖的基本參數,高品質的瓊脂糖凝膠應具有孔隙清晰,不易破碎,純度高(硫酸鹽含量低),凝膠強度高,凝膠點較高(室溫下凝固很快),EEO低等特點。

根據瓊脂糖的分離範圍來判斷:

瓊脂糖凝膠分離範圍較廣,常用於DNA凝膠回收,DNA分離,以及確認DNA是否重組,質粒等是否已切開。不同大小的目標片段對應不同濃度的瓊脂糖。根據高濃度適合分離小片段的原則,您可以參考下表找到適合您需求的最佳凝膠濃度。

瓊脂糖濃度

≥3

2-3

1-2

0.7-1

≤0.7

DNA 片段大小 (bp)

≤200

200-700

700-1500

1500-5000

≥5000

Yeasen 高品質瓊脂糖-覆蓋多種應用場景,滿足您的需求

產品名稱

產品編號

產品規格

應用場景

瓊脂糖

10208ES60/76

100 克 / 500 克

常規核酸電泳

產品優勢

低電滲性(EEO ≤ 0.13),可實現優異的譜帶分離度、清晰的區分度和更快的遷移速度。

圖3 不同濃度凝膠電泳圖
注意:0.75%瓊脂糖凝膠上樣1 kb梯子; 1% 瓊脂糖凝膠上樣 100 bp 梯度,1 kb ladder、2000 DNA marker、5000 DNA marker; 2% 瓊脂糖凝膠上樣 100 bp 梯度、2000 DNA Marker、5000 DNA Marker。 樣品量:標示純液 2 μL 稀釋5倍,再裝入10μL。 0.75%、1% 和 2% 瓊脂糖凝膠的電泳程序為:115 V 持續 45 分鐘; 130 V 持續 40 分鐘; 130 V,持續 50 分鐘。

凝膠孔隙清晰、通直,凝膠強度高,不易破膠。

註:圖示為產品展示 Yeasen 瓊脂糖 (目錄號:10208ES60)。

高品質瓊脂糖使用方法

瓊脂糖凝膠的濃度通常選擇在0.7%~2%之間。濃度越高,凝膠的分子孔徑越小,DNA遷移速度越慢,解析度越高。相反,濃度越低,DNA遷移速度越快,解析度越低。根據不同的實驗目的,選擇合適的凝膠濃度和相容的電泳緩衝液。

瓊脂糖濃度

有效分離範圍 (bp)

推薦緩衝液

0.5%

2,000-50,000

1×TAE

0.8%

800-10,000

1×TAE

1.0%

400-8,000

1×TAE

1.2%

300-7,000

1×TAE

1.5%

200-3,000

1×TAE/0.5×TBE

2.0%

100-2,000

1×TAE/0.5×TBE

3.0%

25-1,000

0.5×TBE

TAE 緩衝液: TAE緩衝液含有醋酸、EDTA和Tris,適用於快速電泳和分離大片段DNA。乙酸的存在降低了凝膠的pH值,有助於提高電泳速度。
TBE 緩衝液:TBE緩衝液含有硼酸、EDTA和Tris,具有較高的離子強度,適用於小片段DNA的高分辨率分離。硼酸離子的存在增強了凝膠的穩定性,有助於提高分離效率。因此當凝膠濃度較高時,應使用TBE緩衝液以利於條帶分離。

已出版文獻(部分)

  • 李哲,王梅,方華,等。奈米塑膠誘導的抗生素抗藥性質粒在固液界面的吸附加劇了水生生態系統的基因污染。環境污染。 2023.doi:10.1016/j.envpol.2022.120456。IF=10.366(10208ES)
  • 王梅,張勝,鄭剛等。 Card14 的功能獲得性突變透過增強角質形成細胞對 IL-17A 的反應導致自發性銀屑病樣皮膚發炎。免疫。 2018;49(1):66-79.e5。 doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012。如果=19。734
  • 張艷,丁華,王曉玲,等。 MK2透過β-TrCP泛素連接酶促進Tfcp2l1降解,進而調節小鼠胚胎幹細胞自我更新。 Cell Rep. 2021;37(5):109949。 doi:10.1016/j.celrep.2021.109949。如果=9。423
  • Zhu Z, Zhang L, Sheng R, Chen J. 基於微流體的陽離子膽固醇脂質 siRNA 遞送奈米系統:高效體外基因沉默與細胞內行為。國際分子科學雜誌。 2022;23(7):3999。 2022 年 4 月 3 日發布。如果=19。924
  • 趙晨,楊丹,葉燕等。 LT-171-861 抑制 Pim-2 激酶會促進 DNA 損傷,並與 PARP 抑制劑在多發性骨髓瘤中表現出增強的致死作用。生物化學藥理學。 2021;190:114648。 doi:10.1016/j.bcp.2021.114648。如果=5。858
  • 餘建,楊偉,幸勝等。混合金/MnO2@BSA nano用於螢光和磁振造影測定抗壞血酸的粒子。微化學學報。 2019;186(2):89。 2019 年 1 月 10 日發布。如果=5。479
  • 鄭曉玲,徐偉,孫榮,尹紅,董聰,曾華。 硫氧還蛋白還原酶抑制劑乙硒啉與亞硒酸鈉在抑制人類非小細胞肺癌細胞增殖和誘導細胞死亡中的協同作用。化學與生物互動。 2017;275:74-85。 doi:10.1016/j.cbi.2017.07.020。如果=5。194
  • 週菁,熊榮,週菁等。 m6A調節因子IGF2BP1參與菸草致癌物NNK誘導的人類支氣管上皮Beas-2B細胞惡性轉化。毒理學應用藥理學。 2022;436:115849。 doi:10.1016/j.taap.2021.115849。如果=5。219
  • Zhou Y, Liu J, Cai S, Liu D, Jiang R, Wang Y. 人參皂苷 Rg1 對老化 Sca-1⁺ 造血細胞的保護作用。 Mol Med Rep. 2015;12(3):3621-3628。 doi:10.3892/mmr.2015.3884。如果=5。952

相關產品選擇指南

產品定位

產品名稱

產品編號

產品規格

應用場景

核酸染色

YeaRed 核酸凝膠染色劑(水中 10,000 倍)

10202ES76

500 μL

水溶性,具有與EB相同的光譜特性,在300nm紫外光激發下檢測。

DNA 標記

GoldBand DL2000 DNA 標記

10501ES60/80

100 噸/10×100噸

100-2000 鹼基

GoldBand DL5000 DNA 標記

10504ES60/80

100 噸/10×100噸

100-5000 鹼基對

GoldBand 100bp DNA 梯狀圖

10507ES60/80

100 噸/10×100噸

100-1,500 bp

GoldBand 1 kb DNA 梯狀圖

10510ES60/80

100 噸/10×100噸

250-12,000 bp

詢問