GMP RNase R：在圓形RNA研究中解鎖新動量！

環狀RNA（circRNA）是一類獨特的非編碼RNA分子，它們透過一種稱為反向剪接的機制形成，前體mRNA的兩個外顯子在剪接過程中連接成閉環結構，從而避免了線性RNA分子中常見的5'帽子和3'尾巴結構。 這種環狀結構賦予circRNA高度的穩定性，使其不易被細胞內的核酸酶降解。因此它們在細胞中具有較長的半衰期，這使得它們在實際應用中能夠實現低劑量、長效的作用。 此外，circRNA 具有生產過程相對簡單的優勢，因為它不需要 這 修飾核苷酸 封端或多聚腺苷酸化，使環狀RNA成為藥物開發的熱點。

在藥物開發方面具有顯著優勢，具體包括： 上市 以下：

01 更高的穩定性

circRNA 的結構使其能夠抵抗核酸酶的降解，因此 它具有較長的半衰期和在細胞內較高的穩定性，這對於藥物的持續作用至關重要。

02 低免疫原性

與線性RNA相比，circRNA的免疫原性較低，降低了免疫反應的可能性，使其更適合作為藥物載體。

03 高效蛋白質表達

研究表明，工程化的環狀RNA可以在真核細胞中穩定高效地表達蛋白質，這對於蛋白質替代療法尤其重要。

04 潛在的疾病治療應用

circRNA已顯示出在各種疾病的治療中發揮的潛力，包括罕見疾病、癌症治療以及作為疫苗開發的一部分。

05 創新交付系統

新開發的遞送系統，如脂質奈米顆粒（LNPs），可以有效地將circRNA遞送至目標細胞，這對於藥物的靶向和療效至關重要。

06 疫苗研發

circRNA疫苗在COVID-19疫苗研發中展現出潛力，能夠誘導產生更多的中和抗體和有效的T細胞反應，並且與線性mRNA相比在常溫下更穩定，有助於簡化儲存和運輸條件。

07 基因編輯

circRNA在基因編輯領域也展現出潛力，能夠作為基因編輯系統的模板，提供更持久、穩定的蛋白質表現。

circRNA的生產過程包括：模板準備、體外轉錄、DNA模板的去除、環化、純化。 RNA環化後，非環化的RNA需要用核糖核酸酶R（RNase R）消化以富集circRNA。

Yeasen 擁有雙向分子酵素合理設計與定向進化平台，以及專門針對GMP等級產品設計的分子酵素生產基地。 開發生產純度高、消化活性強的GMP級RNase R產品，為新型RNA疫苗/藥物的上市提供支援。

圖1：環狀RNA生產過程圖

（資料來源：Front Immunol 2023 年 1 月 12 日：13：1091797。doi：10.3389/fimmu.2022.1091797。eCollection 2022。）

RNase R (核糖核酸酶 R, RNase R) 是一種 Mg2+ 依賴性的 3'→5' 外切核糖核酸酶，源自於 大腸桿菌。它可以消化所有線性RNA，但難以消化circRNA、Lasso RNA、 或3'端突出的核苷酸少於7個的雙股RNA分子。 RNase R通常用於去除線性RNA分子，達到富集環狀RNA、套索RNA等非線性RNA的目的。

主要應用 區域 是：

  • 基因表現研究；
  • 可變剪接的研究；
  • 從生物樣本中富集circRNA；
  • 辨識內含子套索結構RNA；
  • 辨識外顯子環狀RNA。

產品特性

  • 蛋白純度（SDS-PAGE）≥95%；
  • 無外切酶殘留；
  • 與競爭對手相比，該產品具有同等的線性RNA消化能力；
  • 與競爭對手相比，該產品對circRNA富集具有相似的效果。

性能演示

蛋白純度（SDS-PAGE）≥95%

圖2：蛋白質純度測試： 從左到右，結果針對的是相同產品濃度的不同體積（1 μL、2 μL、3 μL）。結果顯示: Yeasen RNase R產物≥95%。

無外切酶殘基

圖3：核酸外切酶殘留檢測： 新增 20 U Yeasen 以RNase R對0.5μgλDNA-HindⅢ進行消化，37℃孵育4小時，然後進行瓊脂糖凝膠電泳。結果顯示，DNA條帶沒有變化，顯示DNA中沒有殘留的核酸外切酶。 Yeasen RNase R 產品。

與進口品牌RNase R產品在消化線性RNA方面相當

圖 4： Yeasen RNase R產品與進口廠商的RNase R產品消化線性RNA時： Yeasen 將RNase R產品和進口廠商A的RNase R產品分別加入到含有線性RNA底物的反應體系中，結果發現當RNase R產品加入量達到2～4 U時，RNA條帶開始變弱，甚至消失，說明RNase R對線性RNA分子有消化作用。此外，消化能力 Yeasen RNase R產品與進口廠商A的RNase R產品對線性RNA分子的檢測結果相當。

相當於A家進口品牌RNase R產品的circRNA富集效果

圖5：circRNA的富集效果比較 Yeasen RNase R產品與進口廠商RNase R產品A：含circRNA底物的反應體系與 Yeasen 分別為進口廠商A的產品和RNase R產品。結果表明，經 RNA 處理後，RNA 條帶亮度無明顯變化。 Yeasen公司的RNase R產品與進口廠商A的RNase R產品進行比較，顯示circRNA能夠耐受RNase R的消化。 上述結果證實了 Yeasen 產品與進口廠商的RNase R產品均可有效用於circRNA的富集。

客戶回饋

是宜生 RNase R對線性RNA的切割效果相較於其他品牌有較好的表現。

圖6：RNase R消化對線性mRNA分子的影響比較 Yeasen 產品和製造商A和B：反應是透過添加 Yeasen 將RNase R產品與廠商A、B的RNase R產品混合，加入含有1 μg線性mRNA底物的反應體系中。結果表明 Yeasen RNase R產品對線性RNA的消化效率與廠商A和B的RNase R產品相比有較好的表現。

產品資訊

產品名稱

產品代碼

產品規格

RNase R GMP 級（20 U/μL）

14615ES

500U/5000U/20KU/200KU

10×RNase R反應緩衝液GMP級

14616ES

500 微升/1 毫升/5 毫升/10 毫升/100 毫升

參考

1.曲琳，易哲，沈穎，等.針對 SARS-CoV-2 及其新出現的變異體的環狀 RNA 疫苗。 細胞。 2022；185(10):1728-1744.e16。 doi:10.1016/j.cell.2022.03.044

2.陳玲，王晨，孫紅，等.用於發現和分析環狀RNA的生物資訊學工具箱。 簡要的生物資訊。 2021；22(2):1706-1728。 doi:10.1093/bib/bbaa001

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