描述
希夫·卡納斯商標 尿嘧啶+高保真DNA聚合酶，是新一代 高保真DNA 基於 Pfu DNA 聚合酶的聚合酶。希夫·卡納斯商標 Uracil+ 高保真 DNA 聚合酶可對複雜模板進行快速且準確的 PCR 反應。其保真度顯著提高，完全避免了使用含dUTP的引子/模板/dNTP而導致的擴增失敗。本產品配有優化的酵素緩衝液及添加PCR增強組分，使得酵素效率高且模板適應性廣，適合複雜模板的擴增。
產品組件
| 零件編號 | 成分 | 貓號/尺寸 | |
| 10145ES60 | 10145ES76 | ||
| 10145-A | 希夫·卡納斯™ 尿嘧啶+高保真 DNA 聚合酶 (1 U/μL) | 100 μL | 500 μL |
| 10145-B | 2×卡納斯™ 尿嘧啶+ PCR 緩衝液（含 Mg2+、dNTP） | 1毫升×3 | 1毫升×15 |
運輸和儲存
組件隨冰袋一起運輸，可在-20°C 下保存 1 年。
產品應用
使用含有 dUTP 的引子/模板/dNTP 進行高保真文庫擴增。
注意事項
1.為了您的安全與健康，操作時請穿著工作服，戴上一次性手套。
2.僅供研究使用！
指示
希夫·卡納斯商標 尿嘧啶+高保真 DNA 聚合酶的使用方式與傳統的高保真酶略有不同。使用前請先仔細閱讀說明。
1. 推薦反應體系
所有操作應在冰上進行。 2×卡納斯商標 尿嘧啶+ PCR 緩衝液解凍後應充分混合。系統配置前，請預熱PCR儀器。加入各組分後，用移液器將樣本混勻並離心至管底，放入預熱的PCR儀中擴增。使用後，將所有組件放回 -20°C 儲存。
表1 PCR擴增反應
| 成分 | 體積 |
| 模板或連接產物 | 毫升 |
| 2×CanaceTM Uracil+ PCR緩衝液（含Mg2+，dNTPs） | 25 微升 |
| 正向引子（10-25 μM） | 1-2.5 µL |
| 反向引子（10-25 μM） | 1-2。5 微升 |
| Hieff CanaceTM 尿嘧啶+高保真 DNA 聚合酶 (1 U/µL) | 1 微升 |
| 水 | 總計 50 µL |
[筆記]：
1）試劑：使用前請充分解凍各組分；
2)模板：使用純化的高品質DNA模板可以顯著提高擴增的效率和成功率；
3)dNTPs：建議的最終dNTPs濃度為200μM。試劑盒中提供的 dNTP 不含 dUTP。如果特殊情況需要製備含有dUTP的模板，可以添加額外的dUTP至終濃度為400μM。
4)聚合酶濃度：建議1 U/50 μL。可在0.5-2 U/50 μL之間優化，不要超過2 U/50 μL。為了防止聚合酶因 3'→5' 外切核素活性而降解引物，建議在最後一步在反應系統中加入聚合酶。
5)Mg2+終濃度：體系的終濃度為2 mM。如有特殊需要，請請本公司提供低Mg2+濃度或不含Mg2+的緩衝液。
2. 推薦的反應程序
表2 PCR擴增反應步驟
| 步 | 溫度 | 期間 | 循環次數 |
| 初始變性 | 98°C | 1 分鐘 | 1 |
| 變性 | 98°C | 10 秒 | 1~15 |
| 退火 | 60°C | 30 秒 | |
| 擴大 | 72°C | 30 秒 | |
| 最終延伸 | 72°C | 5 分鐘 | 1 |
| 抓住 | 4°C | - | - |
[筆記]：
1）初始變性溫度和時間：建議98℃。對於簡單模板（如質粒 DNA）建議時間為 30 秒，對於文庫建議時間為 1 分鐘，對於複雜模板（如 cDNA 和基因組 DNA）建議時間為 3 分鐘，對於高 GC 含量模板建議時間為 5-10 分鐘。
2）退火溫度及時間：建議60℃，或依需求設定溫度梯度，找出引子退火的最佳溫度。建議退火時間為20秒，可在10-30秒內調整。退火時間過長可能導致擴增產物在凝膠上分散。
3)延伸溫度及時間：建議72℃。延長時間根據實際需求進行調整。
付款和安全
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常問問題
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