描述
產品描述
2×希夫·卡納斯™ Plus PCR Master Mix(含染料)是即用型 2× 預混合溶液,含有 Hieff Canace™ 加上高保真 DNA 聚合酶、dNTP 和優化的緩衝系統。該混合物包括兩種單株抗體,可在室溫下抑制聚合酶活性和 3'→5' 核酸外切酶活性,從而實現高度特異性的熱啟動 PCR。延長因子的增加可達到長片段擴增,目標片段最長可達 13 kb。此酵素具有5'→3' DNA聚合酶活性和3'→5'外切酶活性,其保真度是Taq DNA聚合酶的83倍,是一般Pfu DNA聚合酶的9倍。適用於擴增複雜模板,產生平端PCR產物。
2×希夫·卡納斯™ Plus PCR Master Mix(含染料)具有簡單、靈敏度高、特異性強、穩定性優良等優點。反應體系僅需添加引子和模板,可採用兩步驟PCR方案,簡化流程,節省時間。本產品含有電泳示蹤染料,可直接載入 PCR 產物進行凝膠分析。此外,它還含有一種特殊的保護劑,即使經過反覆的凍融循環也能保證穩定的活性。
規格
分類No。 | 10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08 / 10154ES60 |
尺寸 | 100 μL / 1 毫升 / 5×1 毫升 / 100×1 毫升 |
貯存
本品應儲存於-25~-15℃ 1 年。
指示
1. 推薦的PCR反應體系。
成分 | 體積(微升) | 最終的 專注 |
2× 希夫·卡納斯™ 加 PCR 預混液(含染料)* | 二十五 | 1× |
模板*** | 十 | - |
向前 磷裡默(10 微摩爾/公升)** | 2 | 0.4微摩爾/公升 |
R永恆 磷裡默(10 微摩爾/公升)** | 2 | 0.4微摩爾/公升 |
氫鍵2哦 | 最多 50 | - |
*1× 終濃度混合物含有 1 U/50 μL 聚合酶、2 mmol/L Mg2+和 200 μmol/L dNTP。
**PCR反應中引子終濃度建議為0.2-1 μmol/L,優選0.4 μmol/L。
***25 μL反應體系的建議模板量:
模板類型 | 片段大小(1 kb-10 kb) |
基因組 DNA | 50 奈克至 200 奈克 |
質粒或病毒DNA | 10 皮克至 20 奈克 |
基因 | 1-2.5 μL(不超過PCR總體積的1/10) |
2. 反應程序。
1)兩步驟協議(首選):
循環 步 | 電視僱員。 | 時間 | 週期 |
初始變性 | 98℃ | 3 分分鐘 | 1 |
變性 | 98℃ | 10 秒 | 30-35 |
擴大 | 68℃ | 三十 秒/千字節 | |
弗伊納爾 埃擴充 | 72℃ | 5 分分鐘 | 1 |
2)三步驟方案(常規):
循環 步 | 電視僱員。 | 時間 | 週期 |
初始變性* | 98℃ | 3 分分鐘 | 1 |
變性 | 98℃ | 10 秒 | 30-35 |
退火** | 60℃ | 20 秒 | |
擴大*** | 72℃ | 30秒/kb | |
弗伊納爾 埃擴充 | 72℃ | 5 分分鐘 | 1 |
*初始變性:建議在 98°C 下持續 3 分鐘(高 GC 模板為 5-10 分鐘)。
**退火:建議在 60°C 下進行 20 秒(可在 10-30 秒之間調整)。長時間退火可能會導致凝膠變髒。
***延伸:建議在 72°C 下以 30 秒/kb 進行(對於複雜模板,最高可達 60 秒/kb)。
3)梯度退火協議(建議用於困難目標):
循環 步 | 電視僱員。 | 時間 | 週期 |
初始變性 | 98℃ | 3 分分鐘 | 1 |
變性 | 98℃ | 10 秒 | 15(每次循環降低 1°C) |
梯度退火 | 70-55℃ | 20 秒 | |
擴大 | 72℃ | 30秒/kb | |
變性 | 98°C | 10 秒 | 20 |
退火 | 55 攝氏度 | 20 秒 | |
擴大 | 72°C | 30秒/kb | |
弗伊納爾 埃擴充 | 72℃ | 5 分分鐘 | 1 |
4)不同PCR方案的特性:
協定類型 | 速度 | 特異性 | PCR 產量 | 檢測率 |
兩步 | 最快的 | 高的 | 中等的 | 高的 |
三步 | 中等的 | 中等的 | 最高 | 中等的 |
梯度退火 | 慢的 | 高的 | 中等的 | 高的 |
筆記
1.本產品僅供研究使用。
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付款和安全
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