描述
植物組織直接PCR試劑盒是可對不同種類植物葉片直接進行PCR擴增的試劑盒，適應性廣泛，穩定性強。本試劑盒採用獨特的裂解緩衝液系統，可快速裂解多種植物樣本並釋放基因組DNA。釋放的基因組DNA可直接用作模板，無需在PCR反應中去除蛋白質、RNA或次級代謝物。另外該試劑盒所需樣本量極小，小至1毫米的植物葉片即可用於實驗。
本試劑盒提供的2×Plant Master Mix具有強的擴增相容性，可直接利用樣本的裂解液作為模板進行高效、特異的擴增。本試劑為2倍濃縮的PCR反應混合物，含有除模板和引子外PCR擴增所用的全部成分，大大簡化了操作流程，減少了污染的機會。
此試劑盒可用於基因改造植物的鑑定、植物基因分型等。
船運
產品隨附冰袋運送。
貯存
1. 試劑10187-A[Buffer P1]可在4℃保存1年。
2、試劑10187-B[Buffer P2]，用於中和裂解物，有利於樣本更長時間的保存，4℃下可保存1年。
3. 試劑 10187-C [2×Plant Master Mix] 可在-20℃保存1年。避免反覆凍融。
注意事項
1. 做葉子實驗時，建議使用新鮮採集的葉子組織。如果是長期冷凍組織，則需要保存在-80°C。應盡量避免反覆凍融，以免模板降解，影響PCR效率。葉組織適用於幼葉。如果是成熟的葉子，避免使用葉主脈的組織。
2.建議擴增片段長度在1kb以內，以獲得最佳擴增效率。
3.取樣時，用打孔器或小刀取適當大小的樣本。當樣品不同時，每次處理樣品前都需要清潔打孔器或打孔刀。
4.對於葉組織，建議取1-10 mm葉片，葉片長度過小導致PCR擴增產量低，過多會抑制PCR反應，採用熱裂解、用移液器尖頭搗碎、用研磨機粉碎等方法處理植物葉片。處理後需進行搖動和離心。務必取上清液進行檢測。沉澱會嚴重抑制PCR反應。
5.為了您的安全與健康，操作時請穿著工作服，戴上一次性手套。
6.本產品僅供研究使用！
| 常見問題 | 可能的原因 | 解決方案 |
| 陽性對照及待測樣本均未出現條帶。 | PCR反應系統或反應條件不合適。 | 利用梯度PCR來探索PCR的最佳反應條件。 |
| PCR 試劑儲存不當會導致其失去活性。 | 2×PCR Mix應保存於-20℃，使用時避免反覆凍融。若頻繁使用，可短暫存放於4℃。 | |
| 引子設計問題。 | 嘗試重新設計引子進行檢查。 | |
| 陽性對照有目的條帶，而待測樣本無條帶或條帶較弱。 | 裂解液與中和液的配比不合適，裂解液會影響PCR體系的pH值。 | 正常情況下，中及後的裂解液pH應在7-8左右（裂解產物與Buffer P2應嚴格依照5:1的比例進行中和）。 |
| 樣本裂解混合物儲存不當或儲存時間過長，DNA基因組已降解。 | 裂解物混合物可以在 4°C 下保存 5 天，盡量使用新鮮製備的裂解物混合物進行 PCR。 | |
| 模板添加量不適合。 | 優化模板添加量，在反應體系<5%範圍內。 | |
| PCR 循環次數不足。 | 適當增加PCR循環數，最好是35-40個循環。由於模板的複雜性，一般建議比使用純化的DNA模板多進行5-10個循環的PCR反應。 | |
| 非特異性擴增 | PCR 退火溫度太低、循環次數、引子濃度或模板濃度過高。 | 增加 PCR 退火溫度並減少 PCR 循環數、引子濃度或模板濃度。 |
| PCR 引子不符。 | 重新設計 PCR 引子。 | |
| 配製PCR反應體系時溫度過高或配製後放置時間過長。 | PCR反應體系的製備在低溫下進行，製備完成後儘快進行PCR擴增反應。 | |
| 陰性對照出現目標條帶 | 操作工具或試劑受到污染。 | 實驗中的所有試劑或設備都應高壓滅菌。處理時要小心、輕柔，以防止目標序列被吸入樣本槍或溢出離心管。 |
| 樣品之間的交叉污染。 | 每個採樣器僅用於一個樣品；或每取一次樣品，將取樣器刀片浸入2％次氯酸鈉溶液中，反覆沖洗，然後用乾淨的紙巾擦乾殘留物。 |
付款和安全
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常問問題
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