描述
Quick T4 DNA Ligase為單一酵素產品，可用於NGS文庫建構過程中DNA片段與接頭的連接。本產品已通過高通量定序驗證，品質優良。對於不需要實驗系統調整的客戶，建議購買Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）。
產品組件
| 零件編號 | 成分 | 10301ES40 | 10301ES42 |
| 10301-A | 快速 T4 DNA 連接酶（400 U/µL） | 100 微升 | 1 毫升 |
| 10301-B | 10 × T4 DNA 連接酶緩衝液 | 250 微升 | 2×1,250 µL |
運輸和儲存
產品附帶冰袋運輸，可在-20°C保存兩年。
單位定義
在20 μL連接反應體系中，6 μgλDNA-Hind Ⅲ於16℃反應30 min，使DNA片段連接率達到50%以上所需的酵素量定義為一個酵素單位（U）。
注意事項
1.緩衝液融化時若有少量沉澱，請倒置混合後使用；
2、為了您的安全與健康，操作時請穿著工作服，戴上一次性手套。
3.本產品僅供研究使用！
指示
1.目前主流的DNA文庫建構試劑盒一般都不經過末端修復和A-Tailing處理後進行純化，直接進行adapter ligation。反應體系請參考下述製備。徹底渦旋，短暫旋轉並在 20°C 下孵育 15 分鐘。
| 成分 | 容量 (μL) |
| dA尾DNA | 60 |
| 10 × T4 DNA 連接酶緩衝液 | 10 |
| 50% 聚乙二醇 6000 | 10* |
| DNA 適配器 | 十** |
| 快速T4 DNA連接酶 | 1-5*** |
| 水 | 最多 100 |
[註]：*試劑盒中不提供50% PEG 6000，需自行配製。
**請參考下表以了解適配器的數量。
***Quick T4 DNA Ligase 的用量可依需求添加 1-5 μL。
2. 所用接頭的品質和濃度直接影響連接效率和文庫產量。適配器使用過多可能會產生更多的適配器二聚體，而使用過低可能會影響連接效率和文庫產量。下表列出了使用該試劑盒針對不同輸入 DNA 情況所建議使用的接頭數量。
| 輸入DNA | 適配器：輸入 DNA (摩爾比) | 輸入DNA | 適配器：輸入 DNA (摩爾比) |
| 1微克 | 10：1 | 50 納克 | 100:1 |
| 500 納克 | 20：1 | 25 納克 | 200:1 |
| 250 納克 | 40:1 | 1 納克 | 200:1 |
| 100 納克 | 100:1 | 500 包 | 400:1 |
[註]：輸入DNA摩爾數(pmol)≈輸入DNA(ng)/[0.66×輸入DNA平均長度(bp)]。
接頭連接計算範例：輸入DNA為100ng，長度為300bp，應加入多少接頭？
步驟1：計算輸入DNA的摩爾數。公式：輸入DNA摩爾數(pmol)≈輸入DNA(ng)/[0.66×輸入DNA平均長度(bp)]；輸入DNA摩爾數（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；
步驟2：根據上表，計算新增的適配器的摩爾數；當Input DNA為100ng時，adapter：input DNA的摩爾比為100:1，加入的adapter摩爾數=100×0.5 pmol=50 pmol；
步驟3：計算適配器添加量。 Adapter濃度=15μmol/L（若使用其他公司的Adapter，需依其說明書確定其濃度）；接頭加入體積=接頭添加摩爾數（50 pmol）÷接頭濃度（15 μmol/L）= 3.34 μL（註：15 μmol/L = 15 pmol/ μL）；
綜上所述，可添加適配器的體積為3.4 μL。 （註：適配器最大添加量不超過5μL）。
ase緩衝液。
付款和安全
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常問問題
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