描述
本產品是來自大腸桿菌重組蛋白表現的噬菌體T7 RNA聚合酶。它催化雙股 DNA 上 RNA 從其 T7 啟動子序列 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') 的 5'→3' 合成，並使用 NTP 作為底物。雙股線性平端或5'突出端的DNA可以作為T7 RNA聚合酶的模板，因此線性化的質粒和PCR產物可以作為模板進行體外 RNA 的合成。
注意：G* 是 RNA 轉錄本的第一個鹼基。
本產品依GMP規定生產，以液體形式提供。
特徵
- 合成長轉錄本及短轉錄本，以1 μg DNA模板可產生100-200 μg RNA
- 產量更高且操作簡便
- 降低內毒素
- 檢測是否有內切酶、外切酶、核糖核酸酶
應用
- 放射性標記RNA探針製備
- RNA 生成，用於研究 RNA 結構、加工和催化
- 透過反義RNA控製表達
- mRNA、sgRNA 合成
規格
| 來源 | 表達為 大腸桿菌 重組T7 RNA聚合酶基因 |
| 最佳溫度 | 37℃ |
| 儲存緩衝區 | 50 mM Tris-HCl、1 mM EDTA、10 mM DTT、100 mM NaCl、0.1% Triton X-100，50% (v/v)甘油，pH7.9 25℃ |
| 單位定義 | 在 37°C 和 pH 8.0 條件下，1 小時內將 1 nmol [3H] GMP 摻入酸不溶性沉澱所需的酵素量 定義為1個單位。 |
品質
| COA 項目 | 標準 |
| 活動 | 250-300單位/微升 |
| 蛋白質 專注 | ≥0.5毫克/毫升 |
| 純度 | ≥95% |
| 內毒素 | <20 歐盟/毫克 |
| 殘留蛋白酶 | 消極的 |
| 殘留的核酸外切酶 | 消極的 |
| 殘留切口酶 | 消極的 |
| 殘留 RNase | 消極的 |
| E. 大腸桿菌宿主蛋白 | <50百萬分之一 |
| 大腸桿菌宿主 脫氧核糖核酸 | <10 飛克/單位 |
| 支原體 脫氧核糖核酸 | 消極的 |
成分
| 零件編號 | 姓名 | 10625ES10（10千單位） | 10625ES60（100 千單位） | 10625ES86（2,500 千單位） | 10625ES99 (100 畝) |
| 10625 | T7 RNA 聚合酶 GMP 級（250 U/μL） | 40 微升 | 400 μL | 10 毫升 | 400 毫升 |
運輸和儲存
T7 RNA Polymerase GMP級產品採用乾冰運輸，可在-15℃~-25℃保存一年。
數位
圖 1. 使用 T7 RNA 合成試劑盒體外合成標準 RNA。
反應產物在PCR儀上37℃反應2h，然後用磁珠(Cat#12602)進行純化。採用NanoDrop分光光度計分析產量結果如圖1所示。
圖2. T7試劑盒對不同長度RNA的轉錄展示，分別為電泳圖（圖2A）、毛細管電泳圖（圖2B）及層析圖（圖2C）
圖3.體外加帽RNA的合成。
反應產物在PCR儀上37℃反應2h，然後用磁珠(Cat#12602)進行純化。採用 NanoDrop 分光光度計測定產量結果，如圖 3A 所示。以毛細管電泳分析完整性結果如圖3B所示。
付款和安全
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常問問題
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