描述
這是一種工程化的 T7 RNA 聚合酶變體（低 dsRNA），源自於野生型 T7 RNA 聚合酶並在大腸桿菌中產生。它顯著減少雙股 RNA (dsRNA) 的產生，同時有效地整合帽類似物，並且 表現出與野生型T7 RNA聚合酶相當的高效率體外轉錄（IVT）。 它催化雙股 DNA 上 RNA 從其 T7 啟動子序列 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') 的 5'→3' 合成，並使用 NTP 作為底物。
注意：G* 是 RNA 轉錄本的第一個鹼基。
特徵
- dsRNA 水準低至約 1/100000
- 與 Trilink CleanCap AG 相容
- 與野生稻相當的高產量
- 下限輸入
- 無動物來源 (AOF)
成分
| 零件編號 | 姓名 | 10628ES10 | 10628ES60 | 10628ES72 | 10628ES86 |
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| （10千位元組） | （100千單位） | （250庫） | （2,500 庫拉索） |
| 10628 | CleaScrip™ T7 RNA 聚合酶（低 dsRNA，250 U/μL） | 40 微升 | 400 μL | 1 毫升 | 10 毫升 |
規格
| 來源 | 重組 大腸桿菌 含有 T7 RNA 聚合酶基因 |
| 最佳溫度 | 37℃ |
| 儲存緩衝區 | 50 mM Tris-HCl、1 mM EDTA、10 mM DTT、100 mM NaCl、0.1% Triton X-100，50% (v/v)甘油，pH7.9 25℃ |
| 單位定義 | 加入 1 nmol [3H] GMP在37°C和pH 8.0下1小時內轉化為不溶於酸的沉澱 定義為1個單位。 |
| 推薦 Mg2+ | 30mM 醋酸鎂 |
品質管制 標準
| 我術語 | 規格/標準 |
| 酵素 活動 | 250-300單位/微升 |
| 蛋白質純度 | ≥95% |
| 內毒素 | <20 歐盟/毫克 |
| 蛋白酶 | 消極的 |
| 外切酶 | 消極的 |
| 切口酶 | 消極的 |
| 核糖核酸酶 | 消極的 |
| 大腸桿菌宿主蛋白 | <50百萬分之一 |
| 埃.coli 宿主 脫氧核糖核酸 | <10 飛克/單位 |
| 支原體檢查 | 消極的 |
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數位
圖 2. IVT 產品在小鼠 RA 的免疫原性評估W264.7 細胞（圖 2A 和 2B）。類風濕性關節炎患者 IFN-β mRNA 和蛋白質水準降低W264與野生型相比，轉染了突變體產生的 mRNA 的 .7 細胞表現出更高的免疫反應，表明野生型 T7 RNAP 合成的 mRNA 引發了最強的免疫反應，而來自突變體的 mRNA 則顯示出顯著降低的反應。
圖 3. 以 CleaScript™ T7 RNA 聚合酶合成的 mRNA 中的 dsRNA 含量低於纖維素處理後以野生型酵素合成的 mRNA 中的 dsRNA 含量。
運輸和儲存
這 產品採用乾冰運輸，可在-15℃~-25℃保存一年。
出版品:
FADS 和半合理設計改良的 T7 RNA 聚合酶降低了 dsRNA 的產生，降低了末端轉移酶和 RDRP 活性
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