描述
希菲爾™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye) 是基於 Hifair™ 開發的快速逆轉錄試劑盒 III 1st Strand cDNA合成試劑盒（無染料），適用於PCR擴增及RT-qPCR實驗。與 Hifair™ 相比 III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)，具有穩定的檢測率、特異性和產量保證，總逆轉錄時間可能縮短至6分鐘以內，大大縮短實驗時間。
試劑盒中含有gDNA Digester Mix，可消除RNA模板中殘留的基因組DNA污染，確保後續結果更可靠。此試劑盒提供兩種類型的cDNA合成引子：隨機引子N6和Oligo（dT）18。使用者可以選擇隨機引子 N6、寡核苷酸 (dT)18，或根據需要選擇基因特異性引子作為逆轉錄引子。合成的單股cDNA產物可直接用於後續的PCR或qPCR反應。
規格
| 貨號 | 11150ES10 / 11150ES60 |
| 尺寸 | 10噸/100噸 |
成分
| 零件編號 | 姓名 | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix（無染料） | 50 μL | 500 微升 |
| 11150-B | 5×gDNA 消化混合物 | 20 μL | 200 μL |
| 11150-C | 隨機引子（50 μmol/L） | 20 μL | 200 μL |
| 11150-D | 寡核苷酸 d(T)18 引子（50 μmol/L） | 20 μL | 200 μL |
| 11150-E | 無 RNase 水 | 200 μL | 2×1毫升 |
貯存
本品應儲存於-25~-15℃ 1 年。
指示
- 如果實驗需要去除殘留的基因組 DNA
1）gDNA消化
在無 RNase 的離心管中，製備以下混合物，並輕輕移液混勻。 42℃孵育2分鐘。
| 成分 | 容量 (μL) |
| 無 RNase 水 | 至 10 μL |
| 5× gDNA 消化混合物 | 2 微升 |
| 總 RNA* | 10皮克至5微克 |
| 或 mRNA* | 10pg-500ng |
*建議Total RNA的輸入量不超過2 μg。如果目的基因表現量較低，輸入量可以增加，最多為5 μg Total RNA。
2）逆轉錄反應體系配製（20 μL體系）
| 成分 | 容量 (μL) |
| 上一步驟的反應溶液 | 10 微升 |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix（無染料） | 5 微升 |
| 寡核苷酸 d(T)18 引子 (50 μmol/L)** | 2 微升 |
| 或隨機引子（* 代表 qPCR）（50 μmol/L）** | 或 2 μL |
| 無 RNase 水 | 至 20 μL |
* 引子的量可以根據模板輸入的量進行調整。若逆轉錄產物用於qPCR實驗，可依建議用量在體系中加入隨機引子。
**建議先加入4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (No Dye)，混勻後再加入反轉錄引子，確保引子不受gDNA Digester的影響。
3）逆轉錄程序設置
| 溫度。 | 時間 |
| 55℃* | 5 分鐘** |
| 85℃ | 5 秒 |
* 對於GC含量高或複雜的模板，逆轉錄溫度可以提高到60℃。
** 本產品可合成14 kb以下的cDNA序列。如果需要更長的cDNA產物，可以適當延長反轉錄時間。
- 如果實驗不需要去除基因組 DNA
1）逆轉錄反應體系配製（20 μL體系）
| 成分 | 容量 (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix（無染料） | 5 微升 |
| 寡核苷酸 d(T)18 引子 (50 μmol/L)** | 2 微升 |
| 或隨機引子（* 代表 qPCR）（50 μmol/L）** | 或 2 μL |
| 總 RNA* | 10皮克-5微克 |
| 或mRNA | 10 皮克 - 500 納克 |
| 無 RNase 水 | 至 20 μL |
* 建議Total RNA的輸入量不超過2μg。如果目的基因表現量較低，輸入量可以增加，最多為5 μg Total RNA。
** 引子的數量可依範本輸入的量進行調整。若逆轉錄產物用於qPCR實驗，可依建議用量在體系中加入隨機引子。
2）逆轉錄程序設置
| 溫度。 | 時間 |
| 55℃* | 5 分鐘** |
| 85℃ | 5 秒 |
* 對於GC含量高或複雜的模板，逆轉錄溫度可以提高到60℃。
** 本產品可合成14 kb以下的cDNA序列。如果需要更長的cDNA產物，可以適當延長反轉錄時間。
筆記
- 所有操作都應在冰上進行，並應以避免 RNase 污染的方式進行。
- 本產品僅供研究使用。
- 為了您的安全，請穿著工作服和戴上一次性手套進行操作。
文件：
付款和安全
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常問問題
本產品僅用於研究目的，不用於人類或動物的治療或診斷用途。產品和內容受以下公司的專利、商標和版權保護：
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