海法^™ Advanced One Step RT-qPCR Kit 是基於 SYBR Green I 染料進行螢光定量的試劑盒。使用基因特異性引物，逆轉錄和qPCR反應在一個管中完成，無需反覆開蓋和移液操作，大大提高了檢測效率並降低了污染風險。對於 RNA 樣本，該試劑盒採用耐熱 Hifair^™ V 逆轉錄酶用於高效 cDNA 合成和 UNICON^™ HotStart Taq DNA 聚合酶用於定量擴增。在優化的緩衝體系下，該試劑盒的靈敏度對於高表達的標靶可高達0.1 pg，對於中等表達的標靶可高達1 pg，且該試劑盒也適用於DNA樣本的擴增和定量。此試劑盒適用於DNA樣本的擴增和定量。它能夠對不同植物和動物樣本、細胞和微生物中的核酸進行靈敏的檢測和定量。

規格

成分

貯存

本產品應儲存於-25~-15℃ 離開 從 光 為了 1 年。

指示

1. 反應 系統 配置*****

* 直接依照上述反應體系製備低Rox模型及未經Rox校正的模型。使用 High Rox 模型時，將 Hieff™ SP High Rox 以 1:250 v/v 的比例添加到 2 x Hifair™ Advanced SG Buffer 中，混勻並離心。 2× Hifair^™ 具有 Hieff™ SP High Rox 的高階 SG 緩衝液不會影響 Low Rox 和 No Rox 校正模型的使用。

** 引子最終濃度為0.2 μmol/L，也可依需求在0.1~1 μmol/L之間調整。

*** 此試劑靈敏度極高，總 RNA 範圍為 1 pg-1 μg，人體樣本檢測結果顯示最佳輸入量為 1 pg-100 ng，控制總 Ct 值在 15-30 範圍內為適宜。

**** 建議使用20 μL或50 μL以確保目標基因擴增的有效性和可重複性。

*****請在超淨工作台上準備，並使用無核酸酶殘留的槍頭和反應管；建議使用有過濾筒的吸頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。

2）反應程序

*逆轉錄溫度可依實驗需求在50-55℃之間選擇。對於DNA樣本，可以省略逆轉錄過程。

** 特殊情況下可依引子Tm值調整退火/延伸溫度，建議為60℃。

3）適用機型

不需要 Rox 校準的儀器型號：

Bio-Rad：CFX96、CFX384、iCycler iQ、iQ5、MyiQ、MiniOpticon、Opticon、Opticon 2、Chromo4；

Eppendorf：Mastercycler ep realplex、realplex 2 s；

Qiagen：Corbett Rotor-Gene Q、Rotor-Gene 3000、Rotor-Gene 6000；

羅氏應用科學：LightCycler 480、LightCycler2。0，Lightcycler 96；

賽默飛世爾科技：PikoReal 循環儀；造父變星：SmartCycler； Illumina：Eco qPCR；

Low Rox適用車型：

ABI 7500、7500 Fast、ViiA7、QuantStudio 3 和 5、QuantStudio 6、7、12k Flex；

Stratagene MX3000P、MX3005P、MX4000P；

高Rox適用型號*：

ABI 5700、7000、7300、7700、7900HT Fast、StepOne、StepOne Plus。

* 對於 High Rox 型號，請注意應按比例將 Hieff™ SP High Rox 新增至 2 x Hifair^™ 使用前先使用進階 SG 緩衝液。

筆記

1. 本產品僅供研究使用。
2. 為了您的安全，請穿著工作服和戴上一次性手套進行操作。

文件：

安全資料表

11175ES-A-MSDS-HB230927.PDF

11175ES-B-MSDS-HB230927.PDF

11175ES-碳-MSDS-HB230927.PDF

手冊