Hieff 超快速 DNA 甲基化亞硫酸鹽試劑盒（基於管柱）可快速將 DNA 樣本中未甲基化的胞嘧啶轉化為尿嘧啶，同時保持甲基化的胞嘧啶不變。在高溫亞硫酸鹽處理過程中，雙股 DNA 變性為單股。在 HSO3- 存在下，胞嘧啶殘基會脫氨並轉化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則保持不變。在隨後的 PCR 擴增中，尿嘧啶被胸腺嘧啶 (T) 取代。轉換過程僅需5分鐘，適應的DNA輸入範圍從100 pg到2 μg，對於未甲基化的胞嘧啶，轉換效率可達≥99%。轉換後的DNA適用於PCR擴增及NGS定序等下游應用。

特徵

低輸入： 適用於將 100 pg 至 2 μg 範圍內的樣品轉換為

轉換時間短： 約 5 分鐘。

最小樣品損壞： 轉換後保持良好的樣品完整性。

高轉換效率： 轉換率≥99%, 高 GC 區域的轉換率高，且假陽性率低。

適用於稀有樣本， 例如單細胞DNA甲基化轉換。

能夠對RNA樣本進行甲基化轉換。

產品 成分

筆記：

每盒 10 次測試：在洗滌液中加入 4.4 毫升無水乙醇。

每盒 50 次試驗：在洗滌液中加入 22 毫升無水乙醇。

加入無水乙醇後，顛倒混勻，保存備用。確保瓶蓋緊緊關閉，以防止乙醇蒸發，這會影響試劑性能。

數位

圖 4.使用 12225 和競爭對手的 Q 轉化試劑盒對人類基因組 DNA 樣本進行亞硫酸鹽轉化。隨後，利用甲基化特異性單股 DNA 文庫製備試劑盒來產生文庫。上面給出了文庫產量和品質控制數據。結果表明，在對 12225 和競爭對手 Q 試劑盒的混合文庫進行測序時，12225 試劑盒的數據輸出更高，達到了更高的命中率（％），並且重複率（％）更低。

運輸和儲存

將 12225-A 轉換溶液存放於室溫下，避免光照。其它組件存放於室溫下。保存期限為12個月。

筆記：

1. 為確保下游實驗的成功，需在轉換步驟中精確量化輸入 DNA 的總量。建議使用Qubit 3.0/4.0進行DNA定量，A260/A280比值在1.7~1.9之間。輸入 DNA 範圍應在 100 pg 至 2 μg 之間，最佳範圍為 100 ng 至 1 μg。 DNA 輸入不足會阻礙下游檢測，而輸入過多可能會降低恢復和轉換效率。

2.轉化液、脫磺液、洗滌液中含有易揮發成分。使用後，請立即鎖緊瓶蓋並在室溫下保存。

3. 對於轉化後的樣品，應及時進行下游實驗。短期保存請維持在-20°C，長期保存請維持在-80°C。

4.為了您的安全和健康，操作時請穿戴工作服和一次性手套。

5.本產品僅供研究使用！

指示

試劑及耗材準備： 1.5mL無菌離心管、無酵素水、無水乙醇、PCR管；

公升 亞硫酸鹽轉化率：

1） 根據待檢測樣本數量準備相應的無菌PCR管，按下表配製反應體系：

2） 轉化系統

用移液器將上述系統吹打混勻或渦旋混合5s，短暫離心，將反應液離心至PCR管底部。

五 注意：1.此時PCR管中反應液總體積為200μL。為了使轉化更加完全，應將步驟2)中反應液吹勻後，分成等份並轉移至新的無菌PCR管中，再運行轉化程序。轉換完畢後，將兩支PCR管內的反應液合併放入同一個純化管柱中進行純化。

2. 如果樣品體積在 20 至 40 μL 之間，則減少轉化溶液的體積以保持總體積為 200 μL。

3. 若樣品體積為50μL，則加入150μL轉化液，總體積維持在200μL，轉化時間延長至6-10分鐘。

3）CT轉換程序的設定

將PCR管放置在已設定好程序的PCR儀上，進行反應。

公升 純化

1） 電視轉移 200 μL 轉換 解決方案 磷淨化塔s，離心30-60秒13000 克，棄濾液，將純化柱放入 碳收集管s 再次;

2） 加入 100 μL 洗滌緩衝液 進入 純化柱 （確認已加入無水乙醇），離心30-60秒13000 克，棄濾液，將純化柱放入 碳收集管s 再次;

3） 加入 200 μL 脫磺化緩衝液 進入 純化柱 ，讓反應在室溫下靜置 20 分鐘。反應結束後離心30-60秒13000 克，棄去濾液，將 純化柱 在 碳收集管s 再次;

4） 加入 200 μL 洗滌緩衝液 到 純化柱，離心30-60秒13000 克 棄掉濾液，將 磷淨化塔s 在 碳收集管s 再次;

5） 重複步驟4)一次；

6） 轉移 純化柱 在準備好的1.5 mL離心管中，加入10-30 μL 洗脫緩衝液 開蓋晾乾後移至濾膜中央，收集 脫氧核糖核酸 室溫靜置 1 分鐘，然後 13000 離心 1 分鐘 克；

7） 儲存 脫氧核糖核酸 暫存於-20℃。如需長期保存，請將 脫氧核糖核酸 於-80℃保存，避免不必要的重複凍融。

註：純化的轉化產物可直接用於後續的PCR反應或定序過程。

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