描述
希夫NGS™ MaxUp 人類 rRNA 消耗試劑盒(rRNA 和 ITS/ETS)旨在根據基於 RNase H 的工作流程從人類、小鼠和大鼠總 RNA 中去除 rRNA 和 45S ITS/ETS,並保留 mRNA 和其他非編碼 RNA。此試劑盒適用於完整和部分降解的 RNA 樣本(例如 FFPE RNA)。由於降解的FFPE樣本通常比新鮮組織樣本含有更高比例的ITS/ETS,因此本試劑盒在Human 45S ITS/ETS區域添加探針,去除ITS可顯著提高原始數據中有效數據的比例。
特徵
- 特異性強:專門從人體樣本中移除rRNA和ITS/ETS,尤其是FFPE樣本
- 模板起始量相容性高:適用於100ng~1μg樣品
- 去除效果高:對人類\小鼠、大鼠樣本中的rRNA、ITS、ETS,去除效果達95%以上
- 品質穩定:嚴格的批次性能和穩定性品質控制
應用
- 基因表現研究
- 可變剪接分析
- 非編碼RNA的檢測與發現
- 選擇性多聚腺苷酸化位點的鑑定
- 融合基因檢測
規格
耗盡技術 | 核糖核酸酶H |
樣品類型 | 人類、小鼠和大鼠的總 RNA |
最終產品類型 | mRNA 和其他非編碼 RNA |
反應次數 | 24/96 準備 |
起始物料量 | 100 ng~1 μg 總RNA |
目標 | 從人類總 RNA 中移除 rRNA 和 45S ITS/ETS |
成分
零件編號 | 姓名 | 12257ES24 (24歲) | 12257ES96 (96T) |
12257-A | 雜交緩衝液 | 72 微升 | 288 微升 |
12257-B | 探針混合物(rRNA 和 ITS/ETS) | 48 微升 | 192 微升 |
12257-C | RNase H緩衝液 | 72 微升 | 288 微升 |
12257-D | 核糖核酸酶H | 48 微升 | 192 微升 |
12257-E | DNase I 緩衝液 | 660 微升 | 2×1320μL |
12257-F | 脫氧核糖核酸酶 | 60 μL | 240 微升 |
運輸和儲存
所有零件均以乾冰運輸,可在-15℃~-25℃保存一年。
數位
- rRNA 去除特異性
對於常規樣本,rRNA和ITS/EST可去除98%以上,而對於完整性約50%的FFPE樣本,rRNA和ITS/EST可去除95%以上。同時,完整性較差的FFPE也能有效去除。
表 1. rRNA 去除特異性效果
核糖核酸 品質 | 移動 方案 | 輸入 | 核醣體RNA(%) | 智慧交通系統 / 排放交易系統 (%) | 映射 (%) |
293T 核糖核酸; 淨值=10 | 消除 核醣體RNA | 1微克 | 0.19 | 4.6 | 98.28 |
消除 核醣體RNA 和 智慧交通系統/排放交易系統 | 1微克 | 0.15 | 0.04 | 98.79 | |
福馬林聚乙烯 核糖核酸; DV200 =90% | 消除 核醣體RNA | 500毫微克 | 0.23 | 4.75 | 95.35 |
消除 核醣體RNA 和 智慧交通系統/排放交易系統 | 500毫微克 | 0.21 | 0.02 | 95.42 | |
福馬林聚乙烯 核糖核酸; DV200 =50% | 消除 核醣體RNA | 500毫微克 | 1.4 | 16.28 | 95.57 |
消除 核醣體RNA 和 智慧交通系統/排放交易系統 | 500毫微克 | 0.56 | 0.11 | 95.51 | |
福馬林聚乙烯 核糖核酸; DV200 =20% | 消除 核醣體RNA | 1微克 | 0.35 | 67.61 | 58.4 |
消除 核醣體RNA 和 智慧交通系統/排放交易系統 | 1微克 | 0.79 | 0.84 | 60.35 |
註:採用不同的人類RNA樣本,去除rRNA或rRNA和ITS/ETS,在ITS/ETS之後以RNA library Prep kit進行建立庫。以定序分析離線資料中rRNA及ITS/ETS的比例。
- 定序數據效能
表 2.定序數據效能
樣本 | DV200 | 成套工具 | 乾淨的 問20 (%) | 乾淨的 問30 (%) | 乾淨的 氣相層析 (%) | 核醣體RNA (%) | 智慧交通系統/排放交易系統 (%) | 獨特的(%) |
1 | 24% | | 96.75 | 92.68 | 57.05 | 4.58 | 2.42 | 96.90 |
2 | 40% | 96.56 | 92.42 | 55.31 | 1.93 | 0.63 | 96.45 | |
3 | 53% | 97.4 | 93.52 | 45.19 | 0.23 | 0.01 | 98.08 | |
4 | 76% | 97.67 | 93.78 | 51.28 | 0.44 | 0.01 | 93.63 |
[1] 田松, 張斌, 何燕, 等. CRISPR-iPAS:一種基於 dCAS13 的新型替代多聚腺苷酸化干擾方法。核酸研究。 2022;50(5):e26。 doi:10.1093/nar/gkac108(影響因子:16.971)
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