希夫NGS™ One Pot Flash DNA Library PrepKit 是一種快速酵素法 DNA 文庫製備試劑盒，巫婆 含有高品質的 DNA 片段化酶，將 DNA 片段化、末端修復和 dA 加尾結合為一個步驟，大大減少了文庫製備的時間和成本。

本文庫製備試劑盒相容於所有常見動物、植物、微生物等100 pg-500 ng樣本。

單管快速實現DNA片段化、末端修復及A尾添加反應。 和麥肯錫 高通量測序平台。

特徵

1） 適用於100 pg-500 ng的基因組DNA樣本。

2）與 Illumina 相容 和麥肯錫 高通量測序平台。

3）碎片化、末端修復和 A 尾添加 內部反應 5 分鐘

4）高效率的文庫轉換率和擴增效率。

規格

成分

筆記： * 表示該試劑不包含在該試劑盒中，需要額外試劑。套件 是 相容雙平台 Illumina 與 MGI，但額外的引子混合物（CAT # 13334 MGI 引子混合物 需要 Illumina 的 Cat# 13335 Primer Mix。

貯存

本產品應儲存於-25~-15℃ 1 年。

數位

圖1.檢測10種微生物的DNA

使用以下方法製備文庫： 貓號#12316 協定 ，10 ng ZymoBIOMICS 微生物群落 DNA 標準（Zymo Research® #D6306）。將文庫匯集並在 Illumina 上進行定序（SE75）。定序資料均質化至20M 並對兩個輸入等級的預期和檢測到的組成進行比較。特定微生物gDNA的檢測與預期組成一致。預期成分：新型隱球菌 2%、釀酒酵母 2%、枯草桿菌 12%、大腸桿菌 12%、糞腸球菌 12%、發酵乳桿菌 12%、單核細胞增生李斯特菌 12%、綠膿桿菌 12%、金黃色葡萄球菌 12% 及腸道沙門氏菌 12%。

關於手術

1. 請穿戴工作服和一次性手套進行操作，為了您的安全。

2. 在室溫下解凍組件。 解凍後，透過渦旋充分混合，短暫旋轉管子並將它們放在冰上以備後用。

3.配製各步驟反應溶液時，建議用移液管吹打混合均勻或輕輕振搖。劇烈的震動可能會造成庫產量下降。

4. 為了避免樣品的交叉污染，建議使用帶有過濾元件的槍頭。當吸取不同樣本時請更換槍頭。

5. 建議在有加熱蓋的熱循環儀中進行每個反應步驟。使用前應將熱循環儀預熱至設定溫度。

6.操作不當容易造成氣溶膠污染，影響結果的準確性。建議強制物理隔離 PCR 反應混合區域和 PCR 產物純化檢測區域。附有建庫專用移液器等設備。

7.本產品僅供研究使用。

關於 DNA 碎片

1. 本試劑盒相容範圍為100 pg–500 ng 輸入 DNA。應盡可能使用 A260/A280 = 1.8-2.0 的高品質輸入 DNA。

2.如果Input DNA中含有高濃度的金屬離子螯合劑或其他鹽類，可能會影響後續實驗。建議在 ddH2O 或 Tebuffer（10 mm tris-HCl，pH 8.0-8.5；0.1 mM EDTA）中稀釋 DNA。

3. 對於大多數高品質基因組DNA，酶切時間如表1所示。

表 1. 常規基因組 DNA 片段化建議時間

接頭連接

1. 接頭的濃度直接影響連接效率和文庫產量。過量使用Adapter可能會產生更多的Adapter二聚體；低劑量可能會影響 結紮 效率和文庫產量。表 2 和表 3 列出了建議用量 使用此試劑盒為不同的輸入 DNA 輸入提供適配器。

表 2. 推薦的 Illumina 不同輸入 DNA 的接頭數量

表 3. 推薦的 MGI 不同輸入 DNA 的接頭數量

文庫擴增

應嚴格控制擴增循環數。擴增不充分可能導致文庫產量低；過度擴增可能會引入增加的偏差、錯誤、重複讀取和嵌合產物。表4 列出針對庫產量 1 的建議循環次數 μg.

表 4. 建議循環 100 pg-500 ng 輸入 DNA

基於珠子的 DNA 清理和尺寸選擇

1。 文庫建構過程中有多個步驟需要DNA純化磁珠。我們推薦 Hieff NGS™ DNA 選擇珠（Yeasen 目錄號 12601) 或 AMPure™ XP 磁珠（Beckman Cat#A63880）用於 DNA 純化和尺寸選擇。

2。 磁珠使用前應先在室溫下平衡，否則產量會下降，且會影響大小選擇效果。

3。 使用前應以渦旋或移液將磁珠混合均勻。

4。 轉移上清液時不要吸出珠子，即使是微量的珠子也可能影響接下來的反應。

5。 80%乙醇應新鮮配製，否則影響回收效率。

6。 在洗脫產品之前，磁珠應該在室溫下乾燥。乾燥不夠容易造成乙醇殘留影響後續反應；過度乾燥會導致磁珠破裂，降低純化產率。通常情況下，在室溫下乾燥 3-5 分鐘就足以讓珠子完全乾燥。

7。 如有需要，純化或大小選擇的 DNA 樣本洗脫於 0.1× TE 緩衝液可在 4°C 下保存 1-2 週，或在 -20°C 下保存一個月。

圖書館品質分析

1. 建構的文庫質量一般透過測量濃度和粒徑分佈來分析。

2. 可以用基於螢光的方法（例如 Qubit 和 PicoGreen 或 qPCR）測量文庫濃度。

3. 不建議使用基於吸光度的定量方法，例如NanoDrop。

4. 建議使用 qPCR 方法進行文庫定量：基於螢光的方法（例如 Qubit 和 PicoGreen）無法區分不完整的 dsDNA 結構（沒有接頭或僅一端連接接頭的插入片段）和完整的文庫。 qPCR方法只會擴增和測量兩端都連接有接頭的完整文庫（可定序文庫），從而為載入提供更準確的測量。

5. 可以使用Agilent Bioanalyzer或其他基於毛細管電泳或微流體原理的設備來分析文庫的大小分佈。

文件：

安全資料表

12316_MSDS_HB250211_EN.PDF

手冊

12316_手冊_版本 E否20241225.pdf