描述
Hieff NGS™ DNA 選擇珠是根據 SPRI（固相逆固定化）原理製備的，適用於製備下一代定序 (NGS) 文庫期間的 DNA 純化和大小選擇。 Hieff NGS™ DNA 選擇珠與各種 DNA 和 RNA 文庫製備試劑盒相容，是 AMPure 珠子。
成分
| 零件編號 | 姓名 | 12601ES08 | 12601ES56 | 12601ES75 |
| 12601 | Hieff NGS™ DNA 選擇珠 | 5 毫升 | 60 毫升 | 450 毫升 |
規格
| 產品線 | DNA 淨化與選擇珠 |
| 起始材料 | 脫氧核糖核酸 |
| 相容性 | 脫氧核糖核酸 |
| 隔離技術 | 磁珠 |
| 最終產品類型 | 脫氧核糖核酸 |
| 適用於（應用程式） | DNA 大小選擇 |
運輸和儲存
這些珠子用冰袋運輸，可以在 2°C-8°C 下保存一年。
指示
- 1. 準備
使用前，將選擇珠在室溫下平衡至少 30 分鐘。
- 2. DNA 大小選擇
尺寸選擇的操作流程如圖1所示，協議如下。
圖 1. DNA 大小選擇流程圖
2.1 每次使用前，請以渦旋或上下移液的方式將珠子徹底混合。
2.2 將第一輪選擇珠加入樣品中（請參閱表1）。以渦旋或上下移液至少 10 次來徹底混合。
2.3 室溫孵育5分鐘。
2.4 短暫旋轉管子並將其放置在磁力架上。當溶液變清澈時（約 5 分鐘），將上清液轉移到新的 PCR 管中。
2.5 依照表 1 將第二輪選擇珠加入步驟 2.4 的樣品中。
2.6 室溫下孵育 5 分鐘。
2.7 短暫旋轉管子並將其放置在磁力架上。當溶液變清澈時（約 5 分鐘），吸出上清液並丟棄。
2.8 將管子保持在磁力架中，並加入200 μL新鮮配製的80％乙醇，不要擾動磁珠，在室溫下孵育30秒。吸出乙醇並丟棄。
2.9 重複步驟 2.8 一次，總共清洗兩次。
2.10 用 10 µL 移液器吸頭除去殘留乙醇。將管子放在磁力架上，打開蓋子風乾選擇珠，直到出現裂痕（約 5 分鐘）。
注意：不要過度乾燥選擇珠。
2.11 從磁力架上取出管子。加入適量的 ddH2O（≥20 µL），並透過渦旋或上下移液至少 10 次來充分混合。
2.12 室溫孵育 5 分鐘。
短暫旋轉管子並將其放置在磁力架上。當溶液變清澈時（約 5 分鐘），將 20 μL 上清液轉移到新管中。
- 3.DNA 大小選擇的建議條件
將小牛胸腺DNA超音波破碎，製備100~1,000 bp的片段，依照表1進行兩輪大小選擇，以Agilent 2100 Bioanalyzer分析結果（圖2）。
表 1. DNA 大小選擇的建議條件
| DNA片段長度 | 250-350 基點 | 320-420 鹼基 | 450-550 鹼基 | 550-700 鹼基對 | 700-900 鹼基 | 800-1,000 bp |
| 珠子比例： 第一輪 DNA | 0.80× | 0.70× | 0.60× | 0.55× | 0.50× | 0.45× |
| 珠子比例： 第二個 DNA 圓形的 | 0.20× | 0.20× | 0.20× | 0.15× | 0.15× | 0.15× |
註：表中「×」表示樣本DNA體積。例如，文庫插入片段長度為250bp，樣本DNA體積為100μL，則第一輪分選所用磁珠體積為0.80×100μL=80μL；第二輪分選所用磁珠體積為0.20×100μL=20μL。
圖2. Agilent 2100高靈敏度DNA晶片電泳圖
筆記：
1.為了您的安全與健康，操作時請穿著工作服，戴上一次性手套。
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引自“沃爾巴克氏體近期感染改變了野生灰飛蝨種群的微生物群落。微生物組。2020；8(1):104。2020 年 7 月 2 日發布。doi:10.1186/s40168-020-00878-x”
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