產品描述

Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit 是專門用於 mRNA 純化的磁珠試劑盒。 mRNA 捕獲珠是微米大小的順磁性微球，偶聯 Oligo dT（poly A）尾巴，可透過與 poly A 尾巴的 mRNA 結合從 10 ng 至 4 μg 完整 RNA 中分離 mRNA。

規格

成分

貯存

本品應於2～8℃保存，保存期一年，避免冰凍。

指示

1. 未包含所需材料

磁力架、無核酸酶 PCR 管

2. 手術

1) 平衡 mRNA 捕獲珠 室溫下（約 30 分鐘）。

2) 將10 ng – 4 μg總RNA以無核酸酶水稀釋至50 μL於無核酸酶PCR管中，置於冰上。

3) 透過顛倒或渦旋混合磁珠。將50 μL磁珠加入50 μL總RNA樣本中，吹打6次，混勻。短暫旋轉至管底。

4) 將磁珠和RNA的混合物放入熱循環儀中孵育，並執行以下程序：65°C，5分鐘； 25℃，5分鐘； 25°C，保持。

5) 將試管放在磁力 架子 5分鐘以將mRNA與總RNA分離。小心地除去上清液。

6) 從磁力架上取下管子 架子 並以200 μL Beads Wash Buffer重懸磁珠。將整個體積上下吹打 6 次，以徹底混合。將管子放在磁性 架子 5 分鐘，小心除去上清液。

7）重複步驟6。

8) 從磁力架上取下管子 架子。加入50 μL Tris 緩衝液重懸磁珠，用移液器吹打6次，充分混合。

9)將樣本放入熱循環儀中，執行以下程序洗脫mRNA：80°C，2分鐘； 25°C，保持。

10)從熱循環儀中取出樣品。加入 50μL Beads Binding Buffer，反覆吹打6次，充分混勻。

11) 在室溫下孵育 5 分鐘，讓 mRNA 與磁珠結合。

12） 將管子放在磁性 靜置 5 分鐘，小心除去上清液。

[註]：需使用10 μL移液器吸出剩餘液體。

13） 從磁性 架子，用200 μL Beads Wash Buffer重懸磁珠，重複吹打6次，混勻。將管子放在磁性 架子 室溫下 5 分鐘。取出並丟棄所有上清液。

14) mRNA最終洗脫

方案A： 用於保留轉錄反應

取出管子 來自磁性 架子。加入12μL無核酸酶水 並反覆吹打6次，以徹底混合。 將管子放入熱循環儀中執行以下程序：80°C，2 分鐘。 然後將管子放在磁性 架子 立即，室溫放置5分鐘。待溶液澄清後，小心吸取10 μL上清液至另一個新的無核酸酶PCR管。

方案B： 對於 RNA 文庫製備

根據建庫相關試劑盒說明書，加入適當體積的Frag/Primer Buffer。

筆記

1. 為了您的安全和健康，操作時請穿著工作服和戴上一次性手套。
2. 僅供研究使用。
3. 使用磁珠前務必預熱至室溫並混勻，否則可能會影響樣本的回收效率。
4. 操作過程應嚴格避免RNase和核酸污染。
5. 本品與其他試劑使用時，請依照特定實驗說明進行操作。
6. 為了得到良好的純化效果，需要總RNA具有良好的完整性，並保證RIN值>7.0。