珠蛋白 mRNA 消耗探針（人類） 旨在去除人類珠蛋白mRNA。可有效去除成人、嬰兒和胚胎中的珠蛋白mRNA網卡 來源，包括 HBA1/2、HBB、HBD、HBM、HBG1/2、HBE1、HBQ1 和 HBZ。本產品與 Hieff NGS 搭配使用^商標 MaxUp rRNA 耗竭試劑盒（人類/小鼠/大鼠）（Yeasen#12253) 可有效從總 RNA 中去除 rRNA 和珠蛋白 mRNA。此試劑盒適用於完整和降解的 RNA 樣本。去除rRNA&Globin mRNA後的RNA樣本可用於mRNA和非編碼RNA的高通量定序分析，顯著提升定序結果中有效數據的比例，以及cDNA合成或其他下游應用。

產品應用

適用於100 ng~1 μg人類總RNA樣本， 小鼠和大鼠血液資源，以及完整或部分降解的 RNA 樣本。

產品組件

運輸和儲存

所有組件均採用乾冰運輸，可在-20°C 下保存一年。

數位

總共500ng和100ng人體血液總RNA分別經過rRNA移除和合併rRNA和珠蛋白移除。建庫並定序後比較Globin mRNA含量。

注意事項

1. 請使用不含RNase污染的耗材，並定期清潔實驗區域。建議使用ThermoFisher的RNAZap^商標 高效能核酸去除噴霧，去除RNase污染。

2. RNA 樣本應不含基因組 DNA 污染。如果樣本中殘留 gDNA，則應先用 DNase I 消化，然後純化後再使用。

3. RNA樣本最大輸入量為10μL。若樣本量較大，可以先濃縮。

4. 為了您的安全和健康，操作時請穿著工作服和戴上一次性手套。

5. 僅供研究使用！

指示

1. 探針與 RNA 雜交

1.1 使用無核酸酶水將 10 ng–1 μg 總 RNA 稀釋至 PCR 管中的最終體積為 10 μL。保留 RNA 在冰上。

1.2 集合 以下RNA/探針雜交反應 在冰上 根據表1。

表1 RNA/探針雜交反應

1.3 輕輕上下吹打至少 10 次，徹底混合。將管子放入微量離心機短暫旋轉，以收集管子側面的液體。

1.4 將管子放入熱循環儀中並執行表 2 中的以下程序，將加熱蓋設定為 105°C。

表2 RNA/探針雜交反應程序

2. RNase H 消化

2.1 組裝以下 RNase H 消化反應 在冰上 根據表3。

表3 RNase H消化反應

2.2 輕輕上下吹打至少 10 次，以徹底混合。將管子放入微量離心機短暫旋轉，以收集管子側面的液體。

2.3 將管子放入熱循環儀中並執行以下程序： 蓋子 50°C； 37°C，30分鐘； 4°C，保持。

3. 去氧核糖核酸酶 我 消化

3.1 依表4在冰上配製下列DNase I消化反應。

表4 DNase Ⅰ酶切反應

3.2 輕輕上下吹打至少 10 次，徹底混合。將管子放入微量離心機短暫旋轉，以收集管子側面的液體。

3.3 將管子放入熱循環儀中並執行以下程序： 蓋子打開； 37°C，30分鐘； 4°C，保持。

4. RNA 純化

4.1 平衡 Hieff NGS^商標將 RNA 清潔劑（Cat#12602）恢復至室溫，並在使用前以渦旋徹底重新懸浮珠子。

4.2 添加 110 µL（2.2×） 將珠子加入步驟 3.3 的 RNA 溶液中，透過上下移液至少 10 次徹底混合。

4.3 室溫孵育 5 分鐘，使 RNA 與珠子結合。

4.4 將管子放在磁力架上，將磁珠與上清液分離。 當溶液變清澈時（約 3 分鐘），棄去上清液。注意不要讓移液器尖頭碰到珠子。

4.5 將管子放在磁力架上。 將 200 µL 新鮮製備的 80% 乙醇加入管中。室溫下孵育 30 秒，然後棄去上清液。注意不要讓移液器尖頭碰到珠子。

4.6 重複步驟 4.5 一次，總共清洗兩次。

4.7 用 10 µL 去除殘留乙醇 - 移液管吸頭。 將管子放在磁力架上，打開蓋子，讓珠子風乾長達 5 分鐘。

4.8 從磁力架上取出管子。加入 11 μL 無核酸酶水，從珠子中洗脫 RNA。透過上下吹打至少 10 次來徹底混合，並短暫旋轉試管。

4.9 室溫下孵育 5 分鐘。將管子放在磁力架上，直到溶液變清澈（約 3 分鐘）。

4.10 將10 μL上清液轉移至無核酸酶管。

注意：如果需要在此時停止，樣品可以儲存在–80°C 下。