描述
希夫™ Versatility T4 DNA Ligase 是 T4 DNA Ligase 的變體。此酵素適用於催化黏滯分子或平端分子之間的連接反應。它是一種單酶產品，用於在下一代定序（NGS）文庫製備過程中連接DNA片段和接頭。希夫® 多功能 T4 DNA 連接酶已通過高通量測序得到廣泛驗證，並表現出卓越的品質。
特徵
- 高保真
- 耐熱
規格
| 來源 | 重組大腸桿菌 |
| 儲存緩衝區 | 50 毫米 Tris-HC1,100 毫摩爾KC1,0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50%甘油，pH 7.5士0.2 @25℃ |
| 單位定義 | 在20 μL連接反應體系中，6 μgλDNA-Hind III於16℃反應30分鐘，能催化50%以上DNA片段連接所需的酵素量定義為1個酵素活性單位（U）。 |
成分
| 成分 | 姓名 | 12996ES60 6萬 | 12996ES62 600千焦 |
| 12996-A | 希夫 多功能 T4 DNA 連接酶 (600 U/µL) | 100 μL | 1000 μL |
| 12996-B | 10×T4 DNA連接酶緩衝液 | 500 μL | 3×1500μL |
貯存
本產品應在-25~-15℃下保存2 年。
數位
請留言詢問該酵素與其他頂級耐熱和常規T4 DNA連接酶的性能比較數據。
筆記
1. 請穿著工作服和一次性手套操作，為了您的安全。
2. 如果緩衝液中出現少量沉澱，這屬於正常現象。使用前請將緩衝液倒置並徹底混合。
3. 本產品僅供研究使用。
協定
1. 目前主流的基於連接方法的DNA文庫製備試劑盒通常不需要末端修復和A-tailing後的純化步驟。 DNA片段無需純化，直接進行接頭連接。該套件兼容主流 市售末端修復和A尾系統，用於無縫適配器連接。
在冰上的微量離心管中設定以下反應，透過移液或振搖輕輕混合，短暫離心並在 20°C 下加熱滅活 15 分鐘。
表 1. 接頭連接反應體系
| 成分 | 體積（微升） | 最終濃度 |
| dA尾DNA | 60 | 1× |
| 10×T4 DNA連接酶緩衝液 | 10 | 0.1 μM-0。5 μM |
| 50% 聚乙二醇6000 | 12* | 1 納克 -400 奈克 |
| DNA 適配器 | 5** |
|
| 3~5*** |
| |
| 無核酸酶水 | 向上 至 100 | - |
【筆記】*套件中不提供 50% PEG6000 溶液，您需要自行準備
**請參閱表格 2 對於 適配器的數量。
***T4 DNA Ligase的量可依需求添加3-5 μL。
2. 接頭的濃度直接影響連接效率和文庫產量。過度使用適配器可能會導致 在 更多的適配器二聚體，而低使用率可能會影響連接效率和文庫生產。表 2 列出了針對不同輸入 DNA 量的建議接頭數量。
表 2. 100 pg-1 μg 輸入 DNA 的建議接頭用量
| 輸入DNA | 專注 |
| 0.1 鄰 | |
| 1 納克 | 0.5 μM |
| 10 納克 | 1 μM |
| 25 納克 | 2 μM |
| 100 ng~1000 ng | 10 μM |
【筆記】：適配器數量 可依上表要求調整。
付款和安全
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常問問題
本產品僅用於研究目的，不用於人類或動物的治療或診斷用途。產品和內容受以下公司的專利、商標和版權保護：
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