描述
核糖核酸酶 R (RNase R) 來自 大腸桿菌，是一種鎂依賴性 3′→5′ 外切核糖核酸酶， 能 消化所有線性RNA，但不會消化套索或環狀RNA結構。除 tRNA、5S RNA 和內含子套索外，大多數細胞 RNA 都會被 RNase R 完全消化。 RNase R用於生物樣本中的環狀RNA的富集、內含子套索序列的鑑定、外顯子環狀RNA的鑑定、可變剪接的研究。
特徵
通過 ISO 13485 認證，確保功效和品質。
可批量購買或定製配置。
有效分解線性 RNA，同時保留套索環和環狀 RNA。
線性 RNA 的選擇性消化增強了環狀 RNA 的分離，用於蛋白質生產或內含子 cDNA 文庫建構。
提供GMP級RNAse R（14615）
規格
| 來源 | 重組 大腸桿菌 攜帶 RNAse R 基因的菌株 大腸桿菌 |
| 最佳溫度 | 37℃ |
| 儲存緩衝區 | 50 mM Tris-HCl、100 mM NaCl、 0.1 mM EDTA， 0.1% Triton® X-100， 1 毫米 DTT， 50%甘油，pH7.5 25℃ |
| 單位定義 | 一個單位在 37°C 下 10 分鐘內將 1 μg poly-r(A) 在 20 mM Tris-HCl (pH 8.0)、100 mM KCl 和 0.1 mM MgCl 中轉化為酸溶性核苷酸2。 |
應用
RNase R 是環狀 RNA 合成（circRNA）的基本組成部分。 CircRNA 預計將提高藥物穩定性和生物穩定性。由於其共價閉合結構，環狀RNA能夠抵抗RNA外切酶。 [1,2] RNase R 廣泛應用於各種研究，包括可變剪接、內含子 cDNA 的產生以及剪接中間體和套索的分離。
成分
| 零件編號 | 姓名 | 14606ES72 | 14606ES86 | 14606ES92 |
| 14606-A | RNase R（20 單位/μL） | 12.5 微升 | 125 微升 | 500 μL |
| 14606-B | 10×RNase R反應緩衝液 | 250 微升 | 3 × 1 毫升 | 10 毫升 |
貯存
本產品儲存於-25~-15℃，保質期為2年。
指示
在無菌微量離心管中製備以下反應體系
| 成分 | 體積 |
| 10×RNase R反應緩衝液 | 2 微升 |
| RNA樣本 | 1 微克 |
| RNase R（20 單位/μL） | 2-4U |
| 無 RNase ddH2哦 | 最多 20 微升 |
37℃孵育10- 30分鐘。
數位
圖 1：線性 RNA 分子可被
圖 2： CircRNA 無法被
筆記
- RNase R 的活性需要 0.1-1.0 mM Mg2+；
- 隨著RNA的增加，可以適當延長反應時間及增加酵素用量；
- RNA樣本中的EDTA含量可能會影響RNase R的活性。
- 70℃孵育10分鐘可使酵素失去活性。
參考
- 曲琳，易哲，沈穎等。針對 SARS-CoV-2 及其新出現的變異體的環狀 RNA 疫苗。 細胞。 2022；185(10):1728-1744.e16。 doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
- 陳琳，王晨，孫輝等。用於發現和分析環狀RNA的生物資訊學工具箱。 簡要的生物資訊。 2021；22(2):1706-1728。 doi:10.1093/bib/bbaa001
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