描述
Tth DNA 聚合酶是一種從嗜熱細菌中發現的耐熱 DNA 聚合酶 嗜熱菌HB8。在Mg²⁺存在下，此酵素表現出5′-3′ DNA聚合酶活性及5′-3′外切酶活性，但缺乏3′-5′外切酶活性，使其廣泛應用於PCR擴增反應。在Mn²⁺存在下，此酵素在55-70°C的溫度下表現出強烈的逆轉錄酶活性，適合一步法RT-PCR反應。
規格
單位定義： 活性單位（U）定義為以活化的鮭魚精子DNA作為模板/引物，在74°C下30分鐘內將10 nmol總核苷酸摻入酸不溶性產物中的酵素量。
成分
| 不。 | 姓名 | 尺寸 | |
| 14607ES72 （250單位） | 14607ES80 (1250 （U） | ||
| 14607-A | Tth DNA 聚合酶（5 U/μL） | 50 微升 | 250 微升 |
| 14607-B | 5×T反應 緩衝 | 1 毫升 | 4×1.25 毫升 |
| 14607-C | 10×T次PCR 緩衝 （含 Mg2+） | 500 微升 | 2×1.25 毫升 |
| 14607-D | 50mM 醋酸鎂 | 250 微升 | 1.25 毫升 |
| 14607-E | dNTP 混合物（各 10 mM） | 150 微升 | 750 微升 |
船運 和儲存
船運用乾冰。店鋪 在 -20°C，保存期限2年。
預防措施
1) 若解凍時緩衝液中出現少量沉澱，這是正常現象。使用前請倒置並徹底混合。
2）為了您的安全和健康，操作時請穿戴工作服和一次性手套。
3）本產品僅供研究使用！
指示
建議的 PCR 反應步驟：
1.反應體系的製備
| 姓名 | 體積 （微升） |
| 10×T次PCR 緩衝 （含 Mg2+） | 5 |
| Tth DNA 聚合酶（5 U/μL） | 0.5 |
| dNTP 混合物（各 10 mM） | 1 |
| 上游 底漆 10μM | 2 |
| 下游 底漆 10μM | 2 |
| 模板DNA | 50 pg- 1微克 |
| 氫鍵2哦 | 到 50 |
[註]：Tth DNA Polymerase、上下游引子、dNTP Mixture的用量可依特定實驗需求進行調整。
2. 循環設定
| 步驟 | 溫度(攝氏度） | 時間 | 週期 |
| 預變性 | 94 | 30秒至5分鐘 | 1 |
| 變性 | 94 | 30 秒 |
三十五
|
| 退火 | 50-70 | 30 秒 | |
| 擴大 | 72 | 60秒/kb | |
| 最終延伸 | 72 | 10 分鐘 | 1 |
[註]：反應條件可依特定實驗要求進行調整。
建議的 RT-PCR 反應程序：
1. 反應體系的製備
| 姓名 | 體積 （微升） |
| 5×T反應 緩衝 | 10 |
| Tth DNA 聚合酶（5 U/μL） | 1.5 |
| 50mM 醋酸鎂 | 2.5 |
| dNTP 混合物（各 10 mM） | 1.5 |
| 上游 底漆 10μM | 2 |
| 下游 底漆 10μM | 2 |
| 範本 核糖核酸 | 50 pg- 1微克 |
| 水 | 到 50 |
[註]：Tth DNA Polymerase、上下游引子、dNTP Mixture的用量可依特定實驗需求進行調整。
2.循環設定
| 步驟 | 溫度（攝氏度） | 時間 | 週期 |
| 反轉錄 | 55-70 | 30分鐘 | 1 |
| 預變性 | 94 | 30秒至5分鐘 | 1 |
| 變性 | 94 | 30 秒 |
三十五
|
| 退火 | 50-70 | 30 秒 | |
| 擴大 | 72 | 60秒/kb | |
| 最終延伸 | 72 | 10 分鐘 | 1 |
[註]：反應條件可依特定實驗要求進行調整。
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