描述
Hifair™ 超級逆轉錄酶是新一代逆轉錄酶， 哪個 是 en經過工程設計 來自 M-MLV。此酵素缺乏 RNase H 活性，表現出顯著提高的熱穩定性，可耐受高達 70°C 的反應溫度。它非常適合具有複雜二級結構的RNA模板的高效逆轉錄。
應用
本產品適用於RT-PCR、RT-qPCR、RT-LAMP、RNA-seq和cDNA合成實驗。逆轉錄反應溫度最高可達70℃。
單位定義
一個酵素活力單位（U）定義為以Poly(A).Oligo(dT)為模板引物，在37°C下，10分鐘內將1 nmol dTTP 摻入酸不溶性物質中所需的酵素量。
成分
| 成分 | 姓名 | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | 希菲爾™ 超級逆轉錄酶（200 U/μL） | 50 μL | 250 微升 |
儲存條件
儲存溫度為 -25˚C 至 -15˚C，最長可保存 18 個月。
使用說明
第一鏈 cDNA 合成步驟
1. RNA 變性（可選步驟）
1. RNA變性有助於打開二級結構，顯著提高第一鏈cDNA的產量。
| 成分 | 體積 |
| 無RNase的ddH2O | 至 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) 或隨機引子 (50 μM) 或基因特異性引子 (2 μM) | 1 微升 |
| 模板RNA | 總 RNA：10 pg - 5 μg 或 mRNA：10 pg - 500 ng |
· 在 65°C 下加熱 5 分鐘，然後在冰上快速冷卻 2 分鐘。
· 短暫離心收集反應液，然後按下圖表添加逆轉錄反應混合物。
2. 逆轉錄反應設定（20 μL 系統）
| 成分 | 體積 |
| 上一步驟的反應混合物 | 13 微升 |
| 5×反應緩衝液 | 4 微升 |
| dNTP 混合物 (10 mM) | 1 微升 |
| Hifair® 超級逆轉錄酶 (200 U/μL) | 1 微升 |
| RNase 抑制劑 (40 U/μL) | 1 微升 |
3. 逆轉錄程序設定
| 溫度 | 時間 |
| 25°C* | 5 分鐘 |
| 50-70°C | 15-30分鐘 |
| 85°C** | 5 分鐘 |
*使用隨機引子時，在 25°C 下孵育 5 分鐘。如果使用 Oligo(dT)18 或基因特異性引物，則可以省略此步驟。
85°C加熱5分鐘可使逆轉錄酶失活，可依需求調整。
逆轉錄產物可立即用於後續的PCR或qPCR反應，在-20°C下短期保存，或在分裝後在-80°C下長期保存以避免凍融循環。
預防措施
1. 保持實驗室環境清潔；戴上乾淨的手套和口罩。確保所有實驗耗材均不含 RNase，以防止污染。
2. 所有操作均在冰上進行，以防止 RNA 降解。
3. 使用高品質的RNA樣本，保證高效的逆轉錄。
4. 本產品僅供研究使用。
5. 為了您的安全和健康，處理產品時請穿上實驗服和一次性手套。
文件：
付款和安全
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常問問題
本產品僅用於研究目的，不用於人類或動物的治療或診斷用途。產品和內容受以下公司的專利、商標和版權保護：
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