描述
希菲爾™ 卓越通用多重一步法 RT-qPCR 探針試劑盒(UDG Plus)是一種基於 RNA 為模板的多重定量 PCR 試劑盒。實驗過程中,逆轉錄和定量PCR在同一管內進行,簡化了實驗操作,降低了污染風險。
本試劑盒採用耐熱Hifair™高效合成第一鏈cDNA 逆轉錄酶和 UNICON™ 定量擴增 HotStart Taq DNA 聚合酶。此試劑盒主要含有優化的MP緩衝液、酵素混合物。緩衝溶液中已含有 Mg2+ 和 dNTP 混合物。此外,還添加了能有效抑制非特異性PCR擴增及提高多重qPCR反應擴增效率的因子,在確保擴增效率的同時,可進行多達多重的擴增反應。添加dUTP/UDG系統,有效防止氣溶膠污染的風險。
特徵
特徵
1. 格多功能性: 適用於病原微生物、人類基因組、植物等物種的核酸qPCR擴增與檢測。
2. 高靈敏度: 精心優化的緩衝系統將低濃度模板的檢測靈敏度提高至250拷貝/毫升。
3. dUP/UDG 系統: 引進dUTP/不耐熱UDG防污染體系,高效率降解產品氣溶膠污染,降低假陽性,確保結果真實。
4. 支援英 快速程序: 相容40分鐘快速程序。
5. 超強穩定性: 穩定埃 37℃保存14天,反覆凍融10次。
規格
零件編號 | 16901ES60 / 16901ES80 / 16901ES92 |
尺寸 | 100 溫度 / 1000 電視 / 萬噸 |
成分
姓名 | 16901ES60 (100噸) | 16901ES80 (1,000噸) | 16901ES92 (萬噸) | |
16901-一個 | 500 μL | 5 毫升 | 50 毫升 | |
16901-B | 希菲爾™ 酵素混合物 | 100 μL | 1 毫升 | 10 毫升 |
筆記: 1)5×Hifair™ MP Buffer 是 Hifair™ 的縮寫 優質多重一步法 RT-qPCR 探針緩衝液,包括 dNTP、dUTP、Mg2+、穩定器等等。
2)Hifair™ 酵素混合物 主要包含 希菲爾™ 逆轉錄酶,UNICON™ HotStart Taq DNA 聚合酶, RNase抑制劑, 和 UDGase等等。
貯存
產品儲存溫度為-25℃~-15℃,保質期為1年。應避免反覆凍融。
指示
體積 (μL) | 最終濃度 | |
5×Hifair™ MP 緩衝器 | 5 | 1× |
希菲爾™ 酵素混合物 | 1 | - |
引子混合物(10 μM) | 各 0.4 | 0.16 μM |
探針混合物(10 μM) | 各 0.2 | 0.08μM |
1-5 | - | |
RNase 自由 H2哦 | 至 25 | - |
1. 反應組成:
筆記:使用前請務必搖勻,避免劇烈震動造成過多氣泡。
一個)引子濃度: 底漆 混合物包括多重引物, 根據情況,最佳引子濃度可能在0.1至1.0μM之間。
b)探針濃度:探針混合物包括標記不同螢光基團的多重探針,根據情況最佳探針濃度可能在0.05和0之間。5 μM。
c)模板稀釋:qPCR敏感性較高,建議稀釋模板。對照Ct值在20~35之間較為合適。
d) 系統準備:卸下帶有濾芯的濾頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
2. 優化循環方案
(1) 標準擴增程序
反應階段 | 溫度 | 時間 | 循環 | |
1 | 反轉錄 | 50 攝氏度一個 | 1 | |
2 | 初始變性 | 95°C | 5 分分鐘 | 1 |
3 | 擴增反應 | 95°C | 15 秒 | 45 個循環 |
60°Cb | 三十 秒c |
筆記:
a) 逆轉錄:溫度可選擇 50°C 或 55攝氏度 10-15分鐘。
b) 擴增反應:依設計引子的Tm值調節溫度。
c) 螢光訊號擷取:請依實驗要求設定實驗步驟 樂器 手動的。
(2) 快速擴增程序
| 反應階段 | 溫度 | 時間 | 循環 |
1 | 反轉錄 | 50 攝氏度 | 5 分分鐘 | 1 |
2 | 初始變性 | 95°C | 三十 秒 | 1 |
3 | 擴增反應 | 95°C | 5 秒 | 45 個循環 |
60°C | 20 秒 |
筆記:如果實際的qPCR檢測器支援快速擴增,請進行預測試來確認。
3.應用設備
澳洲商業資訊局 5700、7000、7300、7700、7900HT Fast、StepOne™、StepOne Plus™,ABI 7500、7500 Fast、ViiA™7、QuantStudio™ 3 和 5、QuantStudio™ 6、7、12k Flex;
斯特拉塔金 MX3000P™、MX3005P™、MX4000P™;
伯樂 CFX96™、CFX384™、iCycler iQ™、iQ™5、MyiQ™、MiniOpticon™、Opticon®、Opticon® 2、Chromo4™;
艾本德 Mastercycler® ep realplex、realplex 2 s;
Qigen Corbett Rotor-Gene® Q、Rotor-Gene® 3000、Rotor-Gene® 6000;
羅氏 應用科學LightCycler® 480、LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96;
熱 科學的 PikoReal 循環儀; 造父變星 SmartCycler®; 伊路明納 生態 qPCR; 斯蘭 96S、96P。
筆記
請穿戴必要的個人防護裝備,例如實驗服和手套,以確保您的健康和安全!
請使用不含RNase的耗材 為了 實驗。
本產品適用於 研究 僅使用!
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