描述
這 磁的 殘差 脫氧核糖核酸 樣本 準備套件 是 合適的 為了 這 預處理 的 殘差 脫氧核糖核酸 在 各種各樣的 生物 樣品。它利用獨特的磁珠和精心的 最佳化的緩衝系統。
磁性 殘留DNA樣本製備試劑盒 可與多種宿主細胞殘留DNA一起使用 檢測試劑盒,包括 CHO 宿主細胞 DNA 殘留檢測試劑盒 (Cat#41301ES),HEK293 宿主細胞 DNA 殘留檢測試劑盒 (Cat#41302ES),Vero 宿主細胞 DNA 殘留檢測試劑盒 (目錄號:41303ES), 及大腸桿菌宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒 (目錄號#41304ES)。
產品組件
類別 | 成分 不。 | 成分 姓名 | 貓號/尺寸 | |
18461ES25 (25T) | 18461ES60 (100T) | |||
第一部分 | 18461-A | 蛋白酶 K(20 毫克/毫升) | 0.5 mL/瓶 x1 瓶 | 1 毫升/瓶 x2 瓶 |
第二部分 | 18461-B | 磁性粒子 | 0.5 mL/瓶 x1 瓶 | 1 毫升/瓶 x2 瓶 |
18461-C | 裂解緩衝液 | 2.5 mL/瓶 x1 瓶 | 10 mL/瓶 x1 瓶 | |
18461-D | 結合溶液 | 10mL/瓶 x1瓶 | 40 毫升/瓶 x1 瓶 | |
18461-E | 洗滌緩衝液 A* | 6 mL/瓶 x1 瓶 (使用前加入9 mL乙醇) | 24mL/瓶 x1瓶 (使用前添加36毫升乙醇) | |
18461-F | 洗滌緩衝液 B* | 3 mL/瓶 x1 瓶 (使用前加入12 mL乙醇) | 12mL/小瓶 x1小瓶 (使用前添加48毫升乙醇) | |
18461-G | 洗脫緩衝液 | 2.5 mL/瓶 x1 瓶 | 10 mL/瓶 x1 瓶 | |
第三部分 | 18461-H | 肝醣 | 225 μL/瓶 x1 瓶 | 900 μL/瓶 x1 瓶 |
18461-I | 聚腺苷酸鉀 | 150 μL/瓶 x1 瓶 | 600 μL/瓶 x1 瓶 |
運輸和儲存
1. 第一部分用冰袋運輸,4°C 保存 1 年或 長期儲存溫度為-20°C。
2. 第二部分在室溫下運輸,並在室溫下保存1年。
3. 第三部分用乾冰運輸並儲存於-20°C 為期1年。
4. 收到貨後,請檢查第一部分、第二部分、第三部分三個組分是否齊全,並立即存放在相應的儲存溫度內。
注意事項
1. 使用前請仔細閱讀使用說明書,並嚴格遵守使用說明書進行操作。建議在無塵台或生物安全櫃上進行樣品處理。
2. 常溫保存的溶液要注意觀察是否有沉澱或混濁(特別是冬天等室溫較低時),可37℃水浴至溶液澄清為止,以免影響使用效果。
3. 洗脫過程中可能會有殘留磁珠,因此抽取樣本時盡量避免吸走磁珠。
4. 使用本產品時,請經常更換吸頭以避免交叉污染。
5. 為了您的安全和健康,操作本產品時,請穿戴個人防護裝備(PPE),例如實驗室工作服和一次性手套。
6. 本產品僅供研究使用!
前期準備
1. 自備設備:渦旋振盪器、水浴或金屬浴、離心機、磁分離架、杭州奧盛Auto-Pure32A全自動核酸萃取儀或其他品牌全自動核酸萃取儀。
2. 自備耗材:10μL-1000μL 低吸附濾芯吸頭、1.5mL低吸附離心管、PCR管或96孔板及相應的管蓋或膜。
3. 自製試劑:無水乙醇(分析純)、1×PBS緩衝液(pH 7.4,不含Mg、Ca離子)、超純水。
4. 首次使用時,請將標籤或說明書中標示量的無水乙醇加入洗滌液A*和洗滌液B*的瓶中, 使用前充分混合,並做好標記。使用後請將瓶蓋蓋緊,以保持瓶中的乙醇含量。
手動殘留 DNA 萃取
1. 樣品處理
1.1 若樣本中DNA含量較高,例如疫苗,請以1×PBS緩衝液(pH7.4.不含Mg、Ca離子) 然後提取(樣本的稀釋是為了使檢測值在標準曲線的線性範圍內,確保檢測的準確性,通常可以考慮100倍稀釋)。
1.2 如果要測試的樣品 是乾粉,稀釋至 10 mg/mL 或 100 mg/mL,含 超純水 使用前。
1.3 若樣品基質複雜,應進行標準加入回收實驗,以確定適當的稀釋度。
2. 將 100 μL 樣品加入 1.5 mL 管中, 然後加入 100 μL 裂解緩衝液、10 μL 蛋白酶 K,渦旋並混合 10 秒。
【註】:蛋白樣品濃度0-100 mg/mL時加入10 μL蛋白酶K,蛋白樣品濃度100-200 mg/mL時加入20 μL蛋白酶K。
3. 60°C 孵育 20分鐘。
4.然後添加 400 μL 結合溶液、9 μL 肝醣和 6 μL 聚 A 鉀鹽,渦旋混勻。
5. 加入20 μL磁珠,渦旋混勻,靜置10分鐘。請渦旋並混合 10 秒鐘 每 3 分鐘
【注意事項】:磁珠使用前需渦旋混合,確保磁珠徹底懸浮。一次性加入4-5個樣本後建議再次混合。
7. 短暫離心以使溶液沉澱,然後將離心管放在磁力架上 1-2 分鐘。待磁珠完全吸收後,小心除去液體。
8. 加入500 μL洗滌液A (使用前請檢查是否已加入無水乙醇),振搖或渦旋混勻,確保磁珠分散,無磁珠聚集在離心管壁上。
9. 短暫離心,並將離心管放在磁力架上 1-2 分鐘。待磁珠完全吸收後,小心除去液體。
10. 加入500 μL洗滌液B (使用前請檢查是否已加入無水乙醇), 搖晃或渦旋混勻,確保磁珠分散,沒有磁珠聚集在離心管壁上。
11. 短暫離心,並將離心管放在磁力架上 1-2 分鐘。待磁珠完全吸收後,小心除去液體。
12. 為了確保盡可能去除殘留液體,將管子離心 10 秒鐘 迅速置於磁力架上,並以10 μL移液器吸去殘留液體。
13. 打開管蓋,在室溫下放置 3 分鐘 直至乙醇完全揮發。磁珠表面沒有反光或出現裂紋,表示乙醇已經完全蒸發。
14. 從磁力架上取出試管,加入50-100 μL預熱至65°C的洗脫液,並搖勻。然後短暫離心,在 65°C 下孵育 5 分鐘,每隔 2-3 分鐘搖晃並混合。
15. 再次短暫離心,將離心管放在磁力架上 2 分鐘。待磁珠完全吸附後,小心地將DNA溶液轉移到新的離心管中,並保存在-20°C下,或-80°C下長期保存。
付款和安全
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常問問題
本產品僅用於研究目的,不用於人類或動物的治療或診斷用途。產品和內容受以下公司的專利、商標和版權保護:
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