Taq DNA聚合酶的非特異性擴增是PCR實驗中常見的問題，直接影響檢測結果的解釋，導致擴增靈敏度降低，甚至目標片段的產量降低。利用酵素修飾劑在室溫下封閉Taq DNA聚合酶的活性中心，進而抑制Taq酶在室溫下的DNA聚合酶活性，是目前抑制非特異性擴增最有效的方法。逸生研發的雙封閉抗體不僅封閉了Taq DNA聚合酶的聚合酶活性，也同時封閉了Taq DNA聚合酶的核酸外切酶活性。這種雙重方式有效地防止了由於錯配或引子二聚體引起的非特異性擴增，同時也防止了由於材料降解而產生非特異性訊號，從而雙重增強了試劑的特異性。這使得檢測試劑能夠輕鬆應對運輸或室溫使用。

1.超高擴增特異性－雙封閉抗體可同時封閉聚合酶和核酸外切酶活性，有效避免非特異性擴增並提高特異性。

2.卓越的檢測靈敏度－熱啟動配方可確保有效檢測低豐度基因，提供更高的靈敏度。

3.卓越的產品穩定性－在37°C下放置5天或4°C下放置10天時性能穩定。

4.基線穩定性和良好的線性－解決基線漂移問題，以實現優異的線性。

5.酵素活性釋放迅速－95°C加熱20秒即可釋放95%以上的酵素活性。

6.酵素適用性廣－適用於野生型和突變型Taq酶，每mg抗體可封閉4-10KU的Taq酶。

1 阻斷 Taq DNA 聚合酶外切酶活性

將合成的引子探針分別加入未封閉或以雙封閉抗體封閉的Taq DNA聚合酶反應混合物中，在40°C下進行反應。檢測兩者的螢光訊號，發現雙封閉抗體可以有效封閉Taq DNA聚合酶的核酸外切酶活性。

圖2.雙封閉抗體-內切酶活性封閉效率檢測。

02 檢測靈敏度驗證

分別使用 Yeasen採用雙封閉抗體和T公司抗體封閉Taq酶，再透過ARMS-PCR技術對陽性樣本進行檢測，結果發現，封閉的Taq酶 Yeasen雙封閉抗體ARMS-PCR擴增準確，靈敏度更高。

紅色的：Yeasen 抗體+Taq； 藍色：供應商A抗體+Taq。

圖3. ARMS-PCR擴增曲線。

03 穩定性驗證（4°C 10 天，37°C 5 天）。

以傳統封閉抗體和雙封閉抗體分別封閉Taq DNA聚合酶，然後將聚合酶配製成含有引子和探針的完全預混溶液。將此溶液在 4°C 下放置 10 天或在 37°C 下放置 1、3 和 5 天，然後用於擴增 10,000 個拷貝的 ASF 質粒。觀察擴增曲線和Ct值無明顯變化。

圖4 Taq 聚合酶經傳統阻斷抗體（A）和雙阻斷抗體（B）阻斷後，10,000 拷貝 ASF 質粒的擴增曲線，經 qPCR 系統擴增。

04 基線檢測

在某些條件下，當特定引子與特定緩衝液和儀器結合使用時，可能會出現稱為基線漂移的現象。而使用雙封閉抗體可以有效解決基線漂移的問題，從而有利於基線更加穩定。

圖5. SARS-CoV-2 N基因（A）和ACT基因（B）在qPCR分析中的擴增曲線。

05 線性驗證

利用雙封閉抗體封閉的反應混合物，擴增100,000、10,000、1,000、100個拷貝的ASFV/ACT雙質粒，生成標準曲線。從圖7可以看出，兩者都表現出良好的線性。

圖 6.使用雙嵌段反應混合物產生的 ASFV 基因和 ACT 基因的標準曲線圖。

06 酵素活性釋放試驗

使用來自的雙封閉抗體（Cat#31303） Yeasen 密封Taq酶，95℃熱衝擊20秒，檢測酵素活性。可以觀察到，經過95°C 20秒的熱衝擊後，31303可以釋放95％以上的酵素活性，與T公司的抗體相當。

表 1. 酵素在 95°C 下熱休克 20 秒。

07 多重 Taq 聚合酶檢測

Yeasen使用公司的雙封閉抗體(Cat#31303)封閉三種Taq聚合酶(野生型+兩種突變型)，封閉比例為1μg:5U，測定螢光值及封閉效率。研究發現，對於不同類型的 Taq 聚合酶， Yeasen的雙封閉抗體（Cat#31303）表現出了良好的封閉效果。

表2.不同類型Taq聚合酶的阻斷效率。