線性化聚乙烯亞胺 PEI 25000 轉染試劑是一種高電荷陽離子聚合物，能輕易結合帶負電荷的核酸分子，形成複合物，並使得複合物進入細胞。此轉染試劑為瞬時轉染試劑，細胞毒性低，轉染效率高，在HEK293、CHO等細胞中基因表現效率高。經驗證，線性PEI轉染試劑廣泛適用於多種細胞系，包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2、Hela細胞等，該試劑與含血清的培養基兼容，可高效地將核酸引入細胞。

規格

運輸和儲存

產品常溫運輸，粉末可在2-8℃保存兩年。此儲備液在 2-8 ºC 下保存，可保存 3 個月。

注意事項


1）配製好的PEI溶液從-20℃取出解凍後，可放於4℃冰箱保存，且不得再冷凍。

2）對大多數細胞來說，每1 μg DNA使用3.0 μL PEI轉染試劑即可達到較高的轉染效率。您也可以嘗試每1 μg DNA使用1.5~4 μL體積的線性PEI轉染試劑進行最佳化。

3）為了您的安全和健康，操作時請穿戴工作服、一次性手套和通風櫃。

4）本產品僅用於科學研究目的，不得供人體使用。

儲備溶液製備（1 mg/mL）


1.材料

PEI 25000、Milli-Q®水/注射用水（WFI）或同等生物級水、12 mol/L鹽酸（HCl）、10 mol/L氫氧化鈉（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空無菌過濾器、無菌HDPE或聚丙烯儲存瓶。

2. 製備儲備溶液（1 mg/mL）

1) 在1 L玻璃燒杯中，將1 g PEI 25000粉末加入900 mL Milli-Q®超純水或其他等效生物水中，在磁力攪拌器上攪拌均勻，產生小渦流。

2)攪拌下逐滴加入鹽酸（12 mol/L），調節pH值至pH<2.0。

3) 蓋上燒杯蓋，攪拌3小時，直到完全溶解；整個過程中保持pH值<2.0。

【注意】：可能會出現一些無法溶解的細小纖維顆粒，這是正常現象。

4) 攪拌下逐滴加入NaOH（10 mol/L），調節pH值至6.9~7.1。

5) 將溶液轉移到量筒中，加水至1L。

6) 以一次性 0.1-0.2 µm PES 真空過濾器過濾並除菌，以獲得 1 mg/mL 的儲備溶液。

7) 依需要分裝並保存在-20°C下，穩定保存1年。

【注意】：保存液重新解凍後，可在4℃保存，穩定保存2週，但不得再冷凍

轉染流程（以6孔板為例）


1.細胞接種：為了提高轉染效率，建議轉染前一天接種細胞，轉染時細胞密度最好為70%~80%。

2. 製備DNA-PEI複合物： 依照下列系統製備DNA-PEI核酸-轉染試劑複合物：

1) 對於每個細胞孔，以100 μL無血清培養基稀釋2 μg目標DNA，充分混合形成DNA稀釋液。

[註]：無血清稀釋液建議使用Opti-MEM或ddH2O

2) 立即將5 μL PEI 25000轉染試劑加入100 μL DNA稀釋液中，渦旋10秒鐘，混合均勻。

3)室溫孵育10-25分鐘，形成DNA-PEI陽離子核酸轉染試劑複合物。

3. 轉染細胞：

1) 在複合物形成期間，移除細胞生長培養基並向每個孔中添加 2 mL 新鮮的預熱完全培養基。

2) 將100 μL DNA-PEI 核酸-PEI 複合物直接加入細胞中，搖晃培養板，輕輕混合。

3) 置於37°C、5% CO2培養箱中培養，轉染後最快7小時即可檢測到轉基因的表達。請您自行判斷合適的測試時間。

4. 穩定旋轉篩選（選購）

轉染24小時後，將細胞傳代培養至新鮮生長培養基（將細胞稀釋10倍以上）中，並於37℃、5% CO2培養箱中培養過夜。第二天，加入與轉染抗性基因相符的篩選藥物。大約1至2週後即可篩選出抗藥性克隆。在此期間，需要經常更換含有篩選藥物的生長培養基。

不同細胞培養容器的轉染劑量（僅供參考）：