描述
活性氧物質檢測試劑盒使用細胞通透性試劑 2',7'–二氯螢光素二乙酸酯 (DCFDA) 來定量評估活細胞樣本中的活性氧物質。親脂性非螢光 DCFDA 透過被動擴散隨後進行去乙醯化很容易穿過細胞膜。去乙醯產物是一種對氧化劑敏感的2′，7′-二氯螢光素(DCHF)。 DCHF 隨後被 ROS 氧化形成 DCF。 DCF 具有強螢光，可透過螢光光譜法或流式細胞儀檢測，激發/發射波長為 480 nm/525 nm。 Rosup 是一種複合混合物，是一種 ROS 誘導劑，可用作陽性對照。
產品組件
| 零件編號 | 成分 | 數量 | 貯存 |
| 50101-A | 二甲基二烯丙基胺 （10 毫米） | 100 微升 | -20 攝氏度 |
| 50101-B | 羅蘇普 （100 毫米） | 1 毫升 | -20 攝氏度 |
運輸和儲存
該套件隨附冰袋。在-20°C 無光照條件下保存一年。避免反覆凍融。
申請方法
1. 試劑製備
DCFH-DA 溶液：打開前先短暫低速離心。透過在無血清培養基中稀釋 10 mM DCFH-DA 來製備工作 DCFH-DA 溶液，以達到 10 μM 的最終濃度。
[註]：DCFH-DA也可以在不含酚紅的培養基中稀釋。使用新鮮配製的DCFH-DA溶液，不建議長期儲存稀釋的DCFH-DA。所需 DCFH-DA 的確切濃度取決於所使用的細胞系，但一般起始範圍為 10-50 μM。對於某些細胞，如果陰性對照（不含DCFH-DA探針）的螢光很強，則將DCFH-DA稀釋至2-5μM，並縮短孵育時間 適當地。
Rosup 溶液：在無血清培養基中稀釋 100 mM Rosup 原液來製備 100 µM Rosup 工作溶液。一般來說，在37℃黑暗條件下與Rosup孵育30分鐘至4小時可以顯著增加ROS。
[註]：Rosup 的孵育時間取決於細胞系的敏感性。例如，Hela 為 30 分鐘，MRC5 為 1.5 小時。若30分鐘內未觀察到ROS的增加，可適當增加誘導時間或濃度。若ROS上升過快，可適當減少誘導時間或降低濃度。
藥物：在含有 10％ FBS 或其他適當溶液的完全培養基中將目標藥物製備至所需濃度。
2. 貼壁細胞的建議實驗方案
a) 細胞準備：實驗前一天在標準細胞培養基中培養貼壁細胞，使得實驗時細胞匯合度達到70％。
b) 藥物誘導：移除培養基。將先前製備的無血清稀釋藥物覆蓋在每個孔中，並在 37°C 黑暗條件下孵育所需的時間。
c) (可選) 陽性對照：以先前製備的 Rosup 溶液覆蓋陽性對照孔，並在 37°C 黑暗條件下孵育所需時間。
[註]：對於刺激時間較短的細胞（一般在2小時以內），也可以先加載探針，再加入Rosup或目的藥物。
d) ROS探針加載：除去所有培養基，用無血清培養基清洗細胞1-2次。用先前製備的 DCFH-DA 溶液覆蓋每個孔。 37℃，暗室孵育 30 分鐘。
e) 棄去培養基並以無血清培養基清洗細胞1-2次，以移除遊離的DCFH-DA。
3. 懸浮細胞建議操作步驟
a) 細胞製備：實驗當天，將懸浮細胞培養至每孔約 1.5 × 105 個細胞。
b) 藥物誘導：透過離心將細胞收集於錐形管中，並將其重懸於適量先前製備的無血清稀釋藥物中，並在 37°C 下在黑暗中孵育所需的時間。
c) (可選) 陽性對照：以先前製備的 Rosup 溶液重新懸浮陽性對照細胞，並在 37°C 黑暗條件下孵育所需時間。
d) ROS 探針加載：收集到新管中，並用 PBS 離心兩次清洗細胞。以先前製備的DCFH-DA溶液重懸細胞，細胞密度為1×106-2×107/mL。然後在 37℃ 黑暗條件下孵育 30 分鐘。每 3-5 分鐘倒置一次管子，以確保探頭和細胞充分接觸。
【註】：細胞密度需依後續的檢測方法進行調整。例如，對於流式細胞儀，單管中的細胞數不應少於104/mL或多於106/mL。
e) 收集細胞並以無血清培養基離心兩次洗滌細胞以去除遊離的DCFH-DA。
4. 螢光檢測與數據分析
螢光顯微鏡測量：使用螢光顯微鏡，使用適合螢光素 (FITC) 的濾光片組進行活細胞顯微鏡檢查。直觀地對細胞的亮度進行評分，並在對照和樣本之間進行比較，或使用影像分析方法比較細胞數位照片之間的訊號。
流式細胞儀測定：以胰蛋白酶消化貼壁細胞，製備單細胞懸浮液；對於懸浮細胞，直接收集細胞。理想情況下，每個實驗條件應分析 10,000 個細胞。實驗期間細胞不應過於密集 (<1 ×106 細胞/mL)。排除碎片並透過門控隔離感興趣的細胞群。使用平均螢光強度，確定對照樣品和處理樣品之間的倍數變化（Ex/Em = 480/525 nm）。
螢光微孔板測量：在有培養基的情況下，立即在螢光板讀數器上以終點模式在 Ex/Em = 480/525 nm 下測量板。從所有測量值中減去空白讀數並確定檢測控制的倍數變化。
注意事項
1. 與DCFH-DA孵育後清洗細胞以減少背景噪音。
2. 建議在孵育後儘快測量螢光，以避免可能發生的錯誤。
3.為了您的安全與健康，操作時請穿著工作服，戴上一次性手套。
4.僅供研究使用！
[1] 張敏，等。光激活沉默 NK 衍生外泌體 (LASNEO) 徵召免疫細胞協同消滅腫瘤。 Adv Sci（Weinh）。 2022 年 8 月；9(22)：e2201135。 doi: 10.1002/advs.202201135。 Epub 2022 年 6 月 4 日。 影響因子：16.806
[2] 張丹等.基於微藻的口服微載體用於腸道菌叢穩態和癌症腸道保護 放射治療。國家通訊社2022 年 3 月 17 日；13(1):1413。 doi: 10.1038/s41467-022-28744-4。 PMID：35301299。 影響因子：14.919
[3] 焦丹等.生物相容性的還原氧化石墨烯刺激的 BMSCs 透過促進破骨細胞生成和血管生成來加速骨重建和矯正牙齒移動。生物活性材料。 2022 年 2 月 6 日； 15：409-425。 doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.01.021。 PMID: 35386350； PMCID：PMC8958387。 影響因子：14.593
[4] 郭 G 等。 CuFe5O8 奈米立方體的空間選擇性化學動力學治療植入物相關感染。 ACS Nano。 2020 年 10 月 27 日；14(10):13391-13405。 doi: 10.1021/acsnano.0c05255。 Epub 2020 年 9 月 22 日。 影響因子：14.588
[5] 楊 C 等.紅磷修飾的 TiO2 奈米棒介導腎細胞癌的光動力和光熱療法。小的。 2021年7月；17(30)：e2101837。 doi: 10.1002/smll.202101837。 Epub 2021 年 6 月 19 日。 影響因子：13.281
[6] 陳小璐等金屬酚網絡包裹的級聯擴增輸送奈米粒子透過聯合飢餓/化學動力學/化學療法克服癌症藥物抗藥性。化學工程雜誌。 2022 年 8 月； 442:136221。 影響因子：13.273
[7] 丁浩，等間質幹細胞封裝在活性氧清除和產生O2的可注射水凝膠中，用於治療心肌梗塞。化學工程雜誌。 2022.133511:1385-8947。 影響因子：13.273
[8] 餘華等具有雷射活化 O2 供應和光熱增強的三重級聯奈米催化劑，可對缺氧腫瘤進行有效的催化治療。生物材料。 2022年1月； 280121308。 PMID：34896860。 影響因子：12.479
[9] 孫 D 等。基於環糊精的奈米製劑實現了人參皂苷 Rg3 和槲皮素的共同遞送，用於結直腸癌的化學免疫治療。 Acta Pharm Sin B. 2022 年 1 月；12(1):378-393。 PMID：35127393。 影響因子：11.614
[10] 熊勇，等.由羥乙基澱粉前藥穩定的腫瘤特異性可活化生物聚合物奈米粒子用於自我擴增協同癌症治療。治療診斷學。 2022年1月1日；12(2):944-962。 PMID：34976222。 影響因子：11.556
[11] 高建等。針對粒線體的超分子「奈米船」同時抑制雙重能量代謝用於腫瘤選擇性和協同化放射治療。治療診斷學。 2022年1月1日；12(3):1286-1302。 PMID：35154487。 影響因子：11.556
[12] 鐘德等磷酸鈣工程光合微藻透過原位調節缺氧和級聯放射光療來對抗缺氧腫瘤。治療診斷學。 2021年1月22日；11(8):3580-3594。 PMID：33664849。 影響因子：11.556
[13] 孫菁,等.穩定化/固化都市固體廢棄物焚燒飛灰的細胞毒性。 J Hazard Mater. 2022 年 2 月 15 日；424 (Pt A)：127369。 doi: 10.1016/j.jhazmat.2021.127369。 Epub 2021 年 9 月 29 日。 如果是，則為10。588
[14] 朱C，等。多功能熱敏水凝膠，透過極化巨噬細胞和清除 RONS 來調節骨關節炎的微環境。 J奈米生物技術。 2022年5月7日；20(1):221。 影響因子：10.435
[15] Pan X 等氧化鋅奈米球用於清除硫化氫和治療大腸癌的鐵死亡。 J奈米生物技術。 2021年11月27日；19(1):392。 doi: 10.1186/s12951-021-01069-y。 PMID: 34838036； PMCID：PMC8626909。 影響因子：10.435
[16] 何傑等.金銀奈米殼促進抗藥性細菌感染的傷口癒合，並可透過表面增強拉曼散射成像進行監測。生物材料。 2020 年 3 月； 234:119763。 PMID：31978871。 影響因子：10.317
[17] 程倩，等.奈米療法幹擾細胞氧化還原穩態，從而大大改善光動力療法。生物材料。 2019年12月； 224:119500。 doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119500。 Epub 2019 年 9 月 17 日。 影響因子：10.273
[18] 鐘德等雷射引發聚集立方 α-Fe2O3@Au nano用於磁振造影和光熱/增強輻射協同治療的複合材料。生物材料。 2019年10月； 219:119369。 PMID：31351244。 影響因子：10.273
[19] 孫 C 等.硒氧化物消除可控制氧化壓力來提高抗腫瘤功效。生物材料。 2019年12月； 225:119514。 doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119514。 Epub 2019 年 9 月 24 日。 影響因子：10.273
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