嘌呤黴素是由白黑鏈黴菌發酵代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，透過抑制蛋白質合成，殺死革蘭氏陽性菌和多種動物及昆蟲細胞。嘌呤黴素在某些情況下對大腸桿菌有效。其機制是 嘌呤黴素 是氨基醯-TrNA分子3'末端的類似物，可與核醣體的A位結合，並融入延伸的勝肽鏈中。嘌呤黴素與A位點結合後，不會參與任何後續反應，導致蛋白質合成過早終止，釋放出C端含有嘌呤黴素的未成熟多肽。

在產生嘌呤黴素的菌株白黑鏈黴菌 (Streptomyces alboniger) 中發現的 pac 基因編碼嘌呤黴素 N-乙醯轉移酶 (PAC)，可產生對嘌呤黴素的抗性。這項特性目前通常用於篩選攜帶pac基因質粒的哺乳動物穩定轉染細胞系。

嘌呤黴素在穩定細胞轉染的選擇上的普遍應用與慢病毒載體的特性有關。目前大多數商業慢病毒載體都帶有pac基因。在一些特殊情況下，嘌呤黴素也可以用來篩選攜帶pac基因質粒的大腸桿菌菌株的轉殖。

本產品適用於細胞培養，常用工作濃度為1-10 µg/mL。

此外， Yeasen 該公司還提供溶液形式的嘌呤黴素（cat# 60209ES），其狀態不同，但具有相同的功能。

特徵

純度≥98％

應用

適用於細胞培養

年代攜帶 pac 基因質粒的 creen 特定哺乳動物穩定轉染細胞株

螢幕 這 攜帶 pac 基因質粒的轉殖大腸桿菌菌株

規格

成分

運輸和儲存

這 頁尿黴素 d鹽酸 產品應儲存於-15℃ 〜-25℃ 為了 2 年。

指示

1. 建議使用濃度

哺乳動物細胞：1-10 μg/mL，最佳濃度需透過殺菌曲線來確定。

大腸桿菌：以LB瓊脂培養基篩選穩定轉殖pac基因的大腸桿菌，濃度為125 μ克/毫升。

筆記： 使用嘌呤黴素篩選穩定的大腸桿菌菌株需要精確的 pH 值調節。

建議濃度 嘌呤黴素 鹽酸鹽

2. 溶解方法

將嘌呤黴素溶於蒸餾水中，配製成 50 mg/mL 的儲備溶液。經 0.22 μm 濾膜，分裝並儲存於-25 至 -15℃。或也可以將其溶解於甲醇中，配製成10 mg/mL的儲存溶液。

3. 確定 嘌呤黴素 殺傷曲線（以shRNA轉染或慢病毒轉導為例）

有效篩選濃度 嘌呤黴素 與細胞類型、生長狀態、細胞密度、細胞代謝和細胞週期位置有關。為了篩選穩定表達 shRNA 的細胞系，確定殺死未轉染/轉導細胞的嘌呤黴素最低濃度至關重要。建議初次做實驗的客戶一定要建立適合自己實驗體系的殺滅曲線。

1）第 1 天：24 孔板以 5 個密度接種-8×104 個細胞/孔，並鋪板足夠數量的孔以用於後續的梯度實驗。細胞在 37℃。

2）第2天：A）準備篩選培養基：含有不同濃度嘌呤黴素的新鮮培養基（如0-15 μg/mL，至少5個梯度）； B) 過夜孵育後，將新鮮配製的篩選培養基更換到細胞中；然後將細胞在 37℃。

3）第4天：更換新鮮的選擇培養基並觀察細胞活力。

4) 根據細胞的生長狀態，每2-3天更換一次新鮮的選擇培養基。

5)每天監測細胞，觀察活細胞率，以確定在抗生素篩選開始後4-6天內有效殺死未轉染或所有未轉染細胞的最低藥物濃度。

4. 哺乳動物穩定轉染細胞系的篩選

轉染含有pac基因的質粒後，在含有嘌呤黴素的培養基中增殖細胞，以篩選穩定的轉染子。

1) 轉染48小時後，將細胞（原始或稀釋的）培養在含有適當濃度嘌呤黴素的新鮮培養基中。

注意：當細胞活躍分裂時抗生素最有效。如果細胞過於密集，抗生素的有效性就會大大降低。最好將細胞接種到密度不超過25%的環境。

2) 取出並更換含有 嘌呤黴素 每2-3天。

3) 篩選後7天評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外一周或更長時間，具體取決於宿主細胞系和轉染篩選效率。

注意：每天觀察細胞生長狀況。嘌呤黴素的篩選至少需要48h，嘌呤黴素有效濃度的篩選期一般為3-10天。

4） 將 5-10 個抗性克隆轉移並放入 35 毫米培養皿中，並繼續以選擇培養基培養 7 天。此富集培養物是為了準備將來的細胞毒性實驗。

文件：

安全資料表

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手冊

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