描述
G418 硫酸鹽，也稱為硫酸慶大霉素，是一種氨基糖苷類抗生素，結構類似慶大霉素 B1。它透過結合 80s 核醣體並阻斷延伸步驟來幹擾蛋白質合成。 G418 硫酸鹽對原核細胞和真核細胞都有毒性，包括細菌、酵母菌、高等植物和哺乳動物細胞以及原生動物和蠕蟲。抗性基因（主要為neo）位於轉座子Tn601（903）或Tn5上，源自於細菌，但可在真核細胞中表現。透過基因重組技術將抗性基因引入細胞，獲得對G418的抗性，用於篩選和維持攜帶抗性基因的原核或真核細胞的培養。
在哺乳動物細胞中，neo整合到真核生物基因組後編碼氨基糖苷3'-磷酸轉移酶（APH(3')II）的表達。此酵素透過共價修飾 G418 的氨基或羥基功能並抑制抗生素-核醣體相互作用使抗生素失活，從而賦予細胞 G418 抗性。在篩選穩定細胞株實驗中，應建立殺傷曲線（劑量反應曲線），以確定殺死非抗藥性細胞的最低有效濃度。
在植物細胞中，轉染nptII基因抗性質粒可以獲得抗性。 nptII 基因也編碼氨基糖苷磷酸轉移酶，這種酶會使幾種抗生素失去活性，包括 G418、卡那黴素和帕洛黴素。
特徵
純度≥98％
標準化生產，採用工廠化批量生產模式
用途廣泛，可用於分子生物學、組織培養生化實驗研究等領域
合作平台覆蓋全
確保產品品質穩定性，批次間差異控制在1%以內
應用
穩定轉染細胞株的篩選
規格
| CAS 編號 | 108321-42-2 |
| 分子式 | 碳20赫40否4哦10·2小時2所以4 |
| 分子量 | 692.7 克/摩爾 |
| 純度 | ≥98％ |
| 效力（無水） | >700單位/毫克 |
| 外貌 | 白色或淡白色粉末 |
| 溶解度 | 溶於H2哦 |
| 結構 |
|
成分
| 零件編號 | 姓名 | 60220ES03 | 60220ES08 |
| 60220 | G418 硫酸鹽（遺傳黴素） | 1 克 | 5 克 |
運輸和儲存
這 G418 硫酸鹽（遺傳黴素） 產品應儲存於-15℃ 〜-25℃ 為了 3 年。
指示
1. G418儲存溶液的製備（50 mg/mL，有效濃度）
1）活動單位的換算
根據以下公式進行轉換：（1000/A0）×A1=A2
A0：G418 的效力值，不同批次的效力值有所不同。請查看瓶子上的批次品質報告或標籤。
A1：您想要的活性 G418 濃度。
A2：G418的實際濃度。
例如此批次的G418活性值為750 U/mg，G418的有效濃度為50 mg/mL，則實際需製備的粉末濃度為1000/750×50 mg/mL=66.67 mg/mL。若配製10 mL G418儲存液（活性濃度50 mg/mL），則應稱量666.7 mg粉末。
2）滅菌保鮮
稱量上述換算所得的實際粉末，加入10 mL無菌去離子水，使其完全溶解。
用 5 mL 無菌去離子水預先濕潤 0.22 μm 針式過濾器，然後透過過濾對 G418 溶液進行除菌。將滅菌後的G418溶液分裝並保存於-20℃。
注意事項： ①混濁的溶液不要過濾，因為溶液尚未完全溶解，過濾過程中會造成藥物的損失，降低最終溶液的活性。 ②不建議使用培養基、磷酸鹽溶液或有機溶劑來配製保存液。
2. 常用篩選濃度
一般而言，最初需要使用高濃度的G418來篩選轉移者，並使用低濃度來維持培養。生長條件、細胞類型和其他環境因素可能會影響G418的有效劑量，因此建議透過殺傷曲線（劑量反應曲線）來確定最佳篩選濃度。
一般哺乳動物細胞的篩選範圍為200～2000 μg/mL，植物細胞：10～100 μg/mL，酵母菌細胞：500～1000 μg/mL。
細胞系實驗數據
| 細胞類型 | 啟動集中力 | 應用 | 參考 |
| 粘菌屬 | a) 10 μg/毫升 b) 30 微克/毫升 | a) 培養基 b) 冷凍乾燥細菌培養 | Hirth 等。等， 程式國家學院科學， 第 79 卷，7356-7360 頁 (1982 年)。 |
| 哺乳動物種類 | a)400 -1000 μg/mL b) 200 μg/毫升 | a) 用於篩選 b) 用於維護 | 迦南和伯格， 程式國家學院科學， 第79卷，5166-5170（1982年）。 |
| 植物 | a) 25-50 μg/mL b) 10 μg/毫升 | a) 用於篩選 b) 用於維護 | Ursic 等。等， 生物化學。生物物理學。決議通訊社， v.101:3,1031-1037（1981）。 |
| 酵母菌 | a) 500 μg/毫升 b) 125-200 μg/mL | a) 用於篩選 b) 用於維護 | 希門尼斯和戴維斯， 自然， 第287卷，869-871（1980年）。 |
| 細菌 | 16微克/毫升 | 用於篩選 | Waitz 等人。等， 抗微生物。化療藥物代理， 第 6:5, 579-581 (1974)。 |
3. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選穩定表現目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的最低抗生素濃度。這可以透過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現。至少應選擇六種濃度。 G418在處理有絲分裂細胞時活性最高，因此細胞需要培養一段時間後再添加G418。
1）第1天：將未轉化細胞置於適當的培養板中，細胞密度為20-25％，37℃，CO培養過夜2；
註：對於需要更高密度來檢測活力的細胞，可以增加接種量。
2）根據細胞類型，在適當範圍內設定G418濃度梯度。哺乳動物細胞可設定為0、50、100、200、400、800、1000 μg/mL。
3)第2天：除去舊培養基，更換為新鮮配製的含有相應藥物濃度的培養基。每個濃度做三次平行試驗。
4)然後每3-4天更換一次含有G418的新鮮培養基。
5)按固定週期（例如每2天）進行活細胞計數，以確定適當的濃度。選擇在理想天數內（一般7-10天）殺死大多數細胞的最低濃度作為穩定轉染細胞篩選的工作濃度。
4. 穩定轉染細胞的篩選
1） 轉染48 h後,以含有適當濃度的G418培養基進行傳代培養(直接傳代或稀釋傳代)。
注意：為了獲得良好的篩選結果，建議稀釋細胞的豐度不超過25％。
2）每3-4天更換一次含有藥物的篩選培養基。
3) 篩選7天後測量細胞集落形成情形。菌落形成可能需要一周或更長時間，具體取決於宿主細胞類型、轉染和篩選效果。
4)挑選5-10個抗性克隆，轉移至35mm細胞培養板中，以含藥篩選培養基培養7天。
5）更換為正常培養基。
文件：
安全資料表
手冊
數位
圖1。不同批次間基因黴素穩定性試驗及有效濃度驗證
實驗菌株：大腸桿菌
G69和G99是兩個不同的批次
測定基因黴素的使用濃度分別為8mg/L、12mg/L、16mg/L，確定有效最低濃度為16mg/L，可完美抑制雜菌的生長。兩批次的性能一致。
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