潮黴素B是由吸水鏈黴菌合成的一種氨基糖苷類抗生素，透過幹擾70S核醣體易位，誘導mRNA模板錯讀，抑制蛋白質合成，進而殺死原核生物（如細菌）、真核生物（如酵母、真菌）及高等哺乳動物真核生物。

源自大腸桿菌的潮黴素抗性基因（hyg或hph）編碼潮黴素B磷酸轉移酶，將潮黴素B解毒為無生物活性的磷酸化產物，使其成為篩選和培養成功轉染潮黴素抗性基因的原核或真核細胞的優良選擇標記。此外，由於作用方式不同，潮黴素B常與G418或殺稻瘟素S合併使用，篩選雙抗藥性細胞株。潮黴素B也可用作抗病毒劑，因為它能選擇性地滲透到因病毒感染而導致膜通透性增加的細胞中並抑制翻譯。它還可以透過與動物飼料混合來發揮驅蟲劑的作用。

本產品為無菌潮黴素B溶液（PBS緩衝液中50mg/mL），可直接與培養基稀釋使用。

特徵

標準化生產，採用工廠化批量生產模式

應用

無菌

穩定轉染細胞株的篩選

規格

成分

運輸和儲存

這 潮黴素 B（50 毫克/毫升） 產品應儲存在 2℃ ~ 8℃ 為了 2 年。

指示

1. 常用篩選濃度

篩選穩定轉移菌株的潮黴素B的工作濃度需要根據細胞類型、培養基、生長條件和細胞代謝率而變化，建議濃度為50-1000 μ克/毫升。對於第一個實驗系統，建議採用殺滅曲線（殺滅曲線），即劑量反應曲線，來決定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞：50-500 μ克/毫升；細菌/植物細胞：20-200 μ克/毫升；真菌：300-1000 μ克/毫升。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選穩定的細胞系，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素的最低濃度。這可以透過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現。至少應安排五種濃度。

1)第1天：將未轉化細胞以20-25％的細胞密度鋪板於適當的培養板中，培養過夜。

註：對於需要更高密度檢測活力的細胞，可以增加接種細胞的數量。

2） 根據細胞類型設定適當範圍內的濃度梯度。哺乳動物細胞可以設定50,100,250,500,750,1000 μ克/毫升。以去離子水或 PBS 緩衝液將潮黴素 B 溶液以 1:10 的比例稀釋至 5 mg/mL。然後按下表將溶液稀釋至相應的工作濃度。

3)第2天：更換為新鮮配製的含有相應藥物濃度的培養基。每個濃度製作三個平行樣品。

4)然後每3-4天更換一次含有藥物的新鮮培養基。

5) 以固定的時間間隔（例如每2天）進行活細胞計數，以確定抑制未轉染細胞生長的適當濃度。選擇在理想天數內（一般7-10天）能夠殺死絕大多數細胞的最低濃度作為穩定轉染子篩選的工作濃度。

3. 哺乳類穩定轉染細胞系的篩選

1)轉染48h後，以含有適當濃度（直接或稀釋）潮黴素B的篩選培養基進行傳代培養。

注意：抗生素對活躍分裂的細胞最有效。如果細胞太密集，抗生素就不會殺死細胞。分裂細胞，使細胞匯合度不超過 25%。

2）每3-4天更換一次篩選培養基。

3) 篩選7天後測量細胞集落形成情形。菌落形成可能需要一周或更長時間，具體取決於宿主細胞類型、轉染和篩選效果。

4)挑取5-10個抗性克隆，轉移至35mm細胞培養板中，以含藥篩選培養基培養7天。

5）更換新鮮且不含藥物的培養基進行培養。

文件：

安全資料表

60224_MSDS_HB220420_EN.pdf

手冊

60224_手冊_HB250115_EN.pdf