描述
金黃色葡萄球菌素 A，也稱為 AbA、巴西芬淨、布雷黴素 A，是一種從絲狀真菌出芽短梗黴 R106 分離出來的環酯勝肽抗生素。具有很強的抗真菌能力，是肌醇磷酸化神經醯胺合成酶AUR1的抑制劑。即使在較低濃度（0.1-0.5 μg/mL）下也對酵母有毒。對短梗黴素A敏感的真菌種類包括釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑假絲酵母(Candida glabrata)、構巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑麴菌(A. niger.)。其作用機轉為金黃色葡萄球菌素A抑制真菌生長所依賴的肌醇磷酰胺(肌醇磷酸神經醯胺，IPC)合成酶的活性，幹擾鞘脂的合成，進而進一步殺死菌株。更多編碼IPC合成酶的基因已被研究，如來自釀酒酵母的AUR 1基因和來自A. sinensis的AURA基因，它們具有同源性。使這些編碼基因沉默會使菌株對金黃色葡萄球菌素 A 產生抗性，例如 AUR 1-C 基因。
金黃色葡萄球菌素 A 非常適合作為篩選陽性克隆的藥物選擇標記。金黃色葡萄球菌素 A 抗性也是酵母單雜交和雙雜交研究中理想的報告基因。本品為金黃色葡萄球菌素A溶於甲醇的溶液，濃度為1mg/mL。
特徵
純度≥97％
標準化生產，採用工廠化批量生產模式
應用
酵母雙雜交研究
酵母單雜交研究
嚴格的酵母藥物選擇標記
金黃色葡萄球菌素 A 抗性是酵母雜交研究的理想報告基因
規格
| CAS 編號 | 127785-64-2 |
| 分子式 | 碳60赫92否8哦11 |
| 分子量 | 1101.42 克/摩爾 |
| 外貌 | 液體溶液 |
| 純度 | ≥97％ |
| 溶解度 | 此粉末可溶於DMSO和甲醇（0.5-10毫克/毫升）；不溶於水 |
| 結構 |
|
成分
| 零件編號 | 姓名 | 60231ES03 | 60231ES08 | 60231ES10 |
| 60231 | 金黃色葡萄球菌素A（抗體） | 1毫克（1毫克/毫升） | 5×1毫克（1毫克/毫升） | 10×1毫克（1毫克/毫升） |
運輸和儲存
這 金黃色葡萄球菌素A（抗體） 產品應儲存在 -15℃ ~ -25℃ 為了 2 年。
指示
1. 工作濃度
具體濃度請參考相關文獻，並依自身實驗情況（如實驗目的、細胞種類、培養特性等）進行探索與最佳化。
2. 細胞實驗（體外實驗）
金黃色葡萄球菌素 A 透過神經醯胺中毒和必需肌醇磷酸神經醯胺的缺乏來抑制酵母細胞的生長[1]。
合成了每個 CArG-box 基序的三重串聯重複序列。所有 DNA 片段都使用適當的限制性位點克隆到 Y1H 載體 pAbAi（Clontech，Mountain View，美國）。然後，將每個組裝的 pAbAi 構建體以 BstbI 線性化，並根據酵母轉化系統 2 手冊（Clontech，美國山景城）轉化為釀酒酵母 Y1HGold 菌株。攜帶所需 DNA 片段的克隆在補充濃度為 100 的金黃色葡萄球菌素 A 的合成尿嘧啶缺失培養基中篩選自活化狀態–900 ng/mL，如圖所示（Clontech，美國山景城）[2]。
擴增SlBES1基因的開放閱讀框(ORF)並連接到pGBKT7-GAL4BD質粒。融合 GAL4BD-SlBES1 構築體進一步轉化為 Y2H Gold 酵母菌細胞。 SD/−使用色氨酸培養基平板培養酵母轉化子。這 α轉化子的半乳糖苷酶活性經由 X-α-gal，並以 Aureobasidin A 篩選 AUR1-C 的表達[3]。
3. 金黃色葡萄球菌素對各種酵母菌的最低抑菌濃度
|
| 拉緊 | 最低抑菌濃度 (µg/毫升) |
| 釀酒酵母 | ATCC9763（二倍體） | 0.2-0.4 |
| SH3328（單倍體） | 0.1 | |
| 清酒酵母（二倍體） | 0.1-0.2 | |
| 燒酒酵母（二倍體） | 0.1 | |
| 啤酒酵母（三倍體或四倍體） | 0.1 | |
| 貝克‘酵母（二倍體） | 0.2-0.4 | |
| 裂殖酵母 | JY-745（單倍體） | 0.1 |
| 白色念珠菌 | TIMM-0136（二倍體） | 0.04 |
| 熱帶栲木是 | TIMM-0324（二倍體） | 0.08 |
4. 操作步驟（針對抗AbA的酵母轉化系統）
1） 將 0.5 mL 過夜酵母培養物加入 50 mL YPD 培養基（成分：1 L 液體培養基含 10 g 酵母萃取物、20 g 聚蛋白腖、20 g D-葡萄糖；固體培養基，再添加 2% 瓊脂）。
2） 30 度孵化℃ 約 6 小時，直至 OD660 為 1-2。使用二倍體時，測量 OD660 為 2-4。
3） 1000 度離心×g 持續 5 分鐘。
4） 將沉澱物懸浮於 10 mL 溶液 A（成分：100 mM 醋酸鋰、10 mM Tris-HCl pH 7.5、1 mM EDTA）中，然後以 1,000×g 持續 5 分鐘。
5） 埃將沉澱物懸浮在溶液 A 中，直到 OD660 為 150。
6） 將 100 µL 細胞懸浮液分裝到試管中，在 30℃ 1小時。
7） 加入 5 µg 載體（環狀或線性 DNA）和 150 µg 載體 DNA（已在 100℃ 10 分鐘，然後快速冷卻）。
注意：pAUR101 需要線性 DNA 來轉換。使用環狀DNA會降低轉化效率，甚至可能失敗。 pAUR112 和 pAUR123 需要完整的質粒 DNA 來轉殖。
8） 加入 850 µL 溶液 B（成分：將 40 g 聚乙二醇 4000 溶於 100 mL 溶液 A 中並充分混合，使用前新鮮配製），輕輕混勻。
9） 30 度孵化℃ 30 分鐘，然後 42℃ 15分鐘。
10） 在室溫下放置 10 分鐘。
11） 以 5,000 rpm 的速度離心 1 分鐘，然後將沉澱物重新懸浮在 5 mL YPD 培養基中。
12） 30 度孵化℃ 6 小時至過夜。
13） 以 5,000-10,000 rpm 的速度離心，並將沉澱物重新懸浮在 1-10 mL 0.9% NaCl 中。
14） 將 100 μL 細胞懸浮液接種至 YPD 選擇性培養基板（含有一定濃度的 AbA，視菌株類型而定）。30 度孵化℃ 持續3至4天，直至轉變完成。
15） 挑選陽性轉化子，和/或確定轉化效率（以每微克質粒 DNA 轉化的菌落數表示）。
文件：
安全資料表
手冊
數位
圖1。 酵母平板生長圖
實驗菌株：GS115
使用量： 0.05微克/毫升、0.1微克/毫升、0.5微克/毫升、1微克/毫升
治療： 3-5 天3 點0℃
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