ملخص

الكويلينتيرزين هو فلوريسين طبيعي متوفر بكثرة في الطبيعة وهو جزيء تخزين الطاقة الضوئية لمعظم الكائنات البحرية المضيئة (أكثر من 75%). يمكن استخدام الكويلينتيرزين كركيزة للعديد من إنزيمات لوسيفيراز، مثل لوسيفيراز الكلى البحرية (Rluc)، ولوسيفيراز المفرز من Gaussia (Gluc)، والبروتينات الضوئية بما في ذلك aequorin وObelia. على عكس نظام لوسيفيراز/لوسيفيراز اليراع، لا يتطلب نظام كولينيترازين/لوسيفيراز أدينوسين ثلاثي الفوسفات (ATP)، مما يجعل من الأسهل دراسة الفلورسنت الحيوي في الجسم الحي. لذلك، يستخدم الكويلينتيرزين عادة كركيزة مضيئة لتجارب الفلورسنت القائمة على اختبارات الجينات المراسلة وتجارب الحيوانات الحية.

الكولينترازين التجاري الرئيسي المستخدم حاليًا هو الكولينترازين الأصلي. كما يتم تصنيع العديد من مشتقات الكولينترازين مثل الكولينترازين h، الكولينترازين 400a، الكولينترازين cp، الكولينترازين f، الكولينترازين hcp، الكولينترازين n. من الناحية النظرية، يمكن استخدام هذه الكولينترازينات في نفس التجارب، ولكن نظرًا لاختلافاتها في الطول الموجي الضوئي، ونفاذية غشاء الخلية، وكفاءة الضوء الكمومية، فإنها تظهر تأثيرات تجريبية مختلفة في نفس التطبيق.

أنواع الكولينترازين

كويلينترازين الأصلي

يُعرف أيضًا باسم حمض الكولينترازين الحر. وهو ركيزة العديد من إنزيمات لوسيفيراز مثل لوسيفيراز رينيلا (Rluc) ولوسيفيراز جاوسيا (Gluc)، وهو أيضًا العامل المساعد لبروتين قنديل البحر المضيء.

سيناريوهات التطبيق: الكشف عن تركيز أيونات الكالسيوم في الخلايا الحية، تحليل تقرير الجينات، دراسة BRET (نقل طاقة الرنين الحيوي الضوئي)، ELISA، HTS والكشف عن الكيمياء الضوئية لمستويات ROS في الأنسجة أو الخلايا، إلخ.

كويلينترازين هـ

وهو الركيزة للعديد من إنزيمات لوسيفيراز مثل لوسيفيراز رينيلا (Rluc) ولوسيفيراز جاوسيا (Gluc)، وهو أيضًا العامل المساعد لبروتين قنديل البحر المضيء.

سيناريو التطبيق: تبلغ شدة الإضاءة أكثر من 10 مرات أعلى من Coelenterazine Native، وهو مناسب لتحليل الجينات المراسل وكشف تركيز أيونات الكالسيوم في الخلايا الحية.

كويلينترازين اتش سي بي

إنه أحد مشتقات Coelenterazine Native. شدة الفلورسنت لمجمع Coelenterazine hcp-Aequorin أعلى بمقدار 190 مرة من شدة مجمع Coelenterazine Native، مع إنتاج كمي مرتفع وسرعة Ca.²⁺ معدل التفاعل، وهو مناسب جدًا للكشف عن مستويات أيونات الكالسيوم.

سيناريو التطبيق: مناسب لاكتشاف مستوى أيونات الكالسيوم.

كويلينترازين 400أ

يُعرف أيضًا باسم DeepBlue CTM، وهو أحد مشتقات Coelenterazine Native. وهو ركيزة جيدة لـ Renilla luciferase (Rluc)، ويبلغ طول موجة انبعاثه حوالي 400 نانومتر، مما يتداخل قليلاً مع إشارة بروتين مستقبل GFP ولا يمكن أكسدته بواسطة Gaussia التي تفرز luciferase (Gluc).

سيناريو التطبيق: إنه الركيزة المفضلة للكولينترازين لأبحاث BRET (نقل طاقة الرنين الحيوي الضوئي).

كويلينترازين ف

إنه الركيزة المفضلة للأيكوورين، والفرق الهيكلي الوحيد عن Coelenterazine Native هو أن المجموعة الهيدروكسيل الموجودة في مجموعة الفينول R-1 يتم استبدالها بالفلور (F).وبالمقارنة مع العدد الإجمالي للفوتونات التي ينتجها مجمع Coelenterazine Native-Apoaequorin، فإن هذا المجمع ينتج 80% فقط من طاقة الفوتون. الميزة هي أن الأمر لا يستغرق سوى القليل من الوقت لتوليد مركب الأيكوورين. عندما يتلامس مع الكالسيوم²⁺، فهو يصدر الضوء بسرعة وبإنتاجية عالية، مع كثافة إنتاج تبلغ 20 مرة من Coelenterazine Native. بالإضافة إلى ذلك، فإنه يتمتع بنفاذية خلوية جيدة.

سيناريو التطبيق: عندما تكون مستويات الكالسيوم مرتفعة للغاية²⁺ تتطلب دراسة تجارب تجديد بروتين قنديل البحر حساسية الكشف، لذا يوصى باستخدام الركائز.

كويلينترازين سي بي

إنه مشتق من Coelenterazine Native. إن المركب البروتيني الضوئي المتكون من بروتين Apoaequorin أكثر إشراقًا بمقدار 15 مرة من Coelenterazine Native وله Ca أسرع.²⁺ معدل التفاعل.

سيناريو التطبيق: يمكن استخدامه في الفحص عالي الإنتاجية للأدوية المرتبطة بمستقبلات البروتين G (GPCRs).

كويلينترازين ن

شدة فلورسنتها أضعف في جميع مشتقات الكولينترازين، ومعدل التفاعل مع الكالسيوم²⁺ أقل بكثير من تلك الموجودة في Coelenterazine Native.

كويلينترازين هـ

مشتق من Coelenterazine Native يحتوي على مجموعة إيثيل واحدة أكثر من Coelenterazine Native من الناحية البنيوية. كركيزة لإنزيم رينيلا لوسيفيراز، تبلغ شدة فلورسنته 137% من Coelenterazine Native. يتمتع Coelenterazine e بتفاعلية عالية في المختبر مع بروتين قنديل البحر المضيء وذروة انبعاث مزدوجة (405 و465)، مما يتيح تحديد Ca²⁺ التركيز في نطاق pCa5-7 بنسبة الطول الموجي المزدوج. هذه الطريقة مستقلة عن تركيز Coelenterazine، وبالتالي تحسين دقة الكشف. نظرًا لأن نفاذية الخلايا لهذا المشتق ضعيفة، فإنه لا يتمتع بهذه الميزة للتجارب ذات الصلة داخل الخلايا.

سيناريو التطبيق: ركيزة مفيدة جدًا للكالسيوم²⁺ كشف حساسية منخفضة.

كويلينترازين 2-ميثيل

إنه مضاد للأكسدة الخلوية قوي. يمكنه التأثير بشكل فعال على أنواع الأكسجين التفاعلية داخل الخلايا، مثل الأكسجين الأحادي والأنيونات الفائقة الأكسيد، والإجهاد التأكسدي هو رابط وسيط في عملية موت الخلايا المبرمج. بالإضافة إلى ذلك، يتميز المركب بخصائص عدم السمية ونفاذية الغشاء، لذلك يمكن استخدامه لدراسة موت الخلايا المبرمج.

تطبيق المنتج:

1) كأداة مهمة لدراسة موت الخلايا المبرمج؛

2) يمكن استخدامه أيضًا في الكيمياء الضوئية للكشف عن مستويات أنيون الفائق أكسيد وأنيون البيروكسينيتريت.

اسم المنتج	الوزن الجزيئي	الصيغة الجزيئية	إيم (نانومتر)	رلك*	الكثافة النسبية	زمن نصف الارتفاع (مللي ثانية)**
الكولينترازين الأصلي	423.46		466	1.00	1	6-30
كويلينترازين هـ	407.48		466	0.75	16	6-30
كويلينترازين اتش سي بي	399.48		445	0.65	500	2-5
كويلينترازين سي بي	415.48		442	0.63	28	2-5
كويلينترازين ف	425.46		472	0.80	20	6-30
كويلينترازين ن	457.52		468	0.25	0.15	6-30
كويلينترازين هـ	449.5		405 و 465	0.5	4	0.15-0.3
2-ميثيل كويلينترازين	331.37		/	/	/	/
كويلينترازين 400 أ	391.48		400	/	/	/

معلومات المنتج

اسم المنتج	رقم الكتالوج	تحديد
د-لوسيفيرين، ملح الصوديوم	40901ES01/02/03/08	100 ملغ/500 ملغ/1 جرام/5 جرام
د-لوسيفيرين، ملح البوتاسيوم	40902ES01/02/03/09	100 ملغ/500 ملغ/1 جرام/5 جرام
د-لوسيفيرين فايرفلاي، حمض حر	40903ES01/02/03	100 ملغ/500 ملغ/1 جرام
كويلينترازين الأصلي	40904ES02/03/08	1×500 ميكروجرام/2×500 ميكروجرام/5 ملجم
كويلينترازين 400أ	40905ES02/03	1×500 ميكروجرام/2×500 ميكروجرام
كويلينترازين هـ	40906ES02/03/08	1×500 ميكروجرام/2×500 ميكروجرام/5 ملجم
كويلينترازين ف	40908ES02/03	1×500 ميكروجرام/2×500 ميكروجرام

الأدبيات المنشورة من المستخدمين (إحصائيات غير كاملة)

1. Xie J، Zheng H، Chen S، Shi X، Mao W، Wang F. التصميم العقلاني لمراسل قابل للتفعيل للتصوير الكمي للربط الشاذ للحمض النووي الريبي في الجسم الحي. Mol Ther Methods Clin Dev. 2020؛ 17: 904-911. نُشر في 18 أبريل 2020.

2. Lin GY, Lin L, Cai XQ, et al. حملة فحص عالية الإنتاجية تحدد جزيئًا صغيرًا منشطًا لمستقبل الببتيد 4 لعائلة الريلاكسين [نُشر عبر الإنترنت قبل الطباعة، 31 مارس 2020]. Acta Pharmacol Sin. 2020؛ 10.1038/s41401-020-0390-x.

3. شاو إل، تشين واي، تشانغ إس، تشانغ زد، كاو واي، يانغ دي، وانغ إم دبليو. تعديل التأثيرات التي تخلفها بروتينات RAMP على أنماط إشارات عائلة مستقبلات الجلوكاجون، مجلة Acta Pharmaceutica Sinica B.

4. هايفينج تشنغ، سي تشن، شينان وانج، جينرونج شي، جي تيان، وفو وانج. مراسل التلألؤ الحيوي المحتفظ به داخل الإنترون للتصوير في الوقت الحقيقي لربط ما قبل الرنا المرسال في الكائنات الحية. مجلة الكيمياء التحليلية 2019، 91، 12392-12398

5. Peiyu Xu، Sijie Huang، Chunyou Mao، ...، Xi Cheng، Yan Zhang، H. Eric Xu. هياكل مجمعات مستقبلات الدوبامين D3 البشرية. 2021، الخلية الجزيئية 81، 1147-1159

6. Moxuan Ji، Xinan Wang، Haifeng Zheng، Wenjie Mao، Xiaorui Shi، Si Chen، Chu Tang، and Fu Wang Ci. مراسل سري لرصد الدم لموت الخلايا البيروبتوزية. شرجي. الكيمياء.

7. F Hu, Y Zhang, Q Liu, Z Wang. PurA يسهل على Edwardsiella piscicida الهروب من تنشيط إشارة NF-κB.Fish & Shellfish Immunology, 2022 - Elsevier

8. هايفنغ تشنغ، شينان وانغ، سي تشين، شياورو شي، جينرونج شيه، وينجي ماو، جي تيان، وفو وانغ. التصوير الحيوي الوظيفي في الوقت الحقيقي لديناميات microRNA الخاصة بالخلايا العصبية أثناء تمايز الخلايا العصبية باستخدام مراسل لوسيفيراز مزدوج. ايه سي اس كيم. Neurosci.DOI: 10.1021/acschemneuro.8b00614