مقدمة عن موت الخلايا المبرمج
موت الخلايا المبرمج هو ظاهرة موت الخلايا المبرمج التي تحدث أثناء نمو الخلية أو عندما تتأثر بعوامل معينة، وتبدأ من خلال تنظيم الجينات داخل الخلايا ومنتجاتها. في مسار موت الخلايا المبرمج، تحدث الأحداث بترتيب زمني، واحدًا تلو الآخر، مما يؤدي إلى ظهور حويصلات موت الخلايا المبرمج، ثم يحدث موت الخلايا المبرمج. يلعب موت الخلايا المبرمج دورًا حاسمًا في نمو الجنين وتكوينه، والحفاظ على عدد ثابت من الخلايا الطبيعية في الأنسجة، ودفاعات الجسم واستجاباته المناعية، والتلف الخلوي الناجم عن المرض أو التسمم، والشيخوخة، وتطور الأورام، وله قيمة علاجية محتملة.
مبدأ الكشف
إن توزيع الفسفوليبيدات في الأغشية الخلوية الطبيعية غير متماثل. يقع الفوسفاتيديل سيرين (PS) على السطح الداخلي لغشاء الخلية في الخلايا الحية، وأثناء موت الخلية المبرمج، يخضع غشاء الخلية للتغيير، ويتم قلب PS من السطح الداخلي لغشاء الخلية إلى السطح الخارجي لغشاء الخلية. يتعرف Annexin V بشكل خاص على PS على سطح الخلايا المبرمجة للموت، بينما يقع PS من الخلايا الحية على السطح الداخلي لغشاء الخلية ولا يمكنه الارتباط بشكل خاص بـ Annexin V.
كما ينعكس PS للخلايا الميتة من السطح الداخلي للغشاء الخلوي إلى السطح الخارجي للغشاء الخلوي، ويتعرف Annexin V أيضًا على PS على سطح الخلايا الميتة، لذلك لا يستطيع Annexin V التمييز بين الخلايا الميتة والخلايا الميتة. في المقابل، كان صبغة PI قادرة على الارتباط بالحمض النووي داخل الخلايا والتمييز بين الخلايا الميتة والخلايا الحية. لا يزال الغشاء الخلوي للخلايا الميتة المبكرة والخلايا الحية سليمًا، ولا يمكن لصبغة PI المرور بحرية عبر الغشاء الخلوي لدخول الخلية والارتباط بالحمض النووي، لذلك لا يمكن لصبغة PI تسمية الخلايا الميتة والخلايا الحية، بينما تكون صبغة PI قادرة على المرور عبر الغشاء الخلوي للخلايا الميتة والارتباط بالحمض النووي داخل الخلية، وستصدر صبغة PI في الخلايا الميتة فلورسنتًا أحمر بعد إثارتها بواسطة ليزر 488 نانومتر، والذي سيتم استقباله بواسطة القناة المقابلة. وبالتالي، يمكن استخدام Annexin V وPI في وقت واحد للتمييز بين الخلايا الحية والخلايا الميتة المبكرة والخلايا الميتة المتأخرة أو الميتة.
الشكل 2 مبدأ اكتشاف Annexin V / PI
الكشف عن طريق قياس التدفق الخلوي
يبلغ أقصى طول موجة إثارة لـ FITC 488 نانومتر، وأقصى طول موجة انبعاث هو 525 نانومتر، ويتم الكشف عن الفلورسنت الأخضر لـ FITC في قناة FL1. يبلغ أقصى طول موجة إثارة لمجمع PI-DNA 535 نانومتر، وأقصى طول موجة انبعاث 615 نانومتر، ويتم الكشف عن الفلورسنت الأحمر لـ PI في قناة FL2 أو FL3. تم إجراء التحليل باستخدام برنامج مثل CellQuest، وتم رسم مخطط تشتت ثنائي اللون مع FITC كإحداثي أفقي وPI كإحداثي رأسي. في التجارب النموذجية، يمكن تقسيم الخلايا إلى ثلاث مجموعات فرعية، حيث تحتوي الخلايا الحية على فلورسنت خلفي منخفض الكثافة للغاية فقط، والخلايا الميتة المبكرة لها فلورسنت أخضر قوي فقط، والخلايا الميتة المتأخرة لها تلطيخ مزدوج بالفلورسنت الأخضر والأحمر.
الشكل 3 الكشف عن طريق قياس التدفق الخلوي
الأسئلة الشائعة
س: هل يمكن تطبيق اختبار موت الخلايا المبرمج Annexin V على النباتات أو البكتيريا (بدائيات النوى)؟
ج: نعم، ولكن من الضروري تحضير البروتوبلاست لأن الخلايا النباتية أو البكتيريا (بدائيات النوى) تحتوي على جدران خلوية. الجرعة المحددة من محلول الصبغة تحتاج فقط إلى غمر الخلايا، ويختلف وقت الصبغ إلى حد ما باختلاف الخلايا.
س: كيف نحكم على نتيجة التجربة؟
أ: الخلايا الحية (Annexin V-/PI-)، والخلايا الميتة المبكرة (Annexin V+/PI-)، والخلايا الميتة المتأخرة والخلايا الميتة تظهر إيجابية مزدوجة (Annexin V+/PI+)، والنوى العارية (Annexin V-/PI+).
س: ما هو الفرق بين Annexin V و TUNEL؟
أ: وسم نهاية النوكليوتيديل ترانسفيراز الطرفية (TUNEL) هو طريقة تلوين تستخدم لتحديد مواقع تجزئة الحمض النووي داخل الخلايا - وهي السمة المميزة لموت الخلايا المتأخر.
تتعرف صبغة Annexin V على المراحل المبكرة من موت الخلايا المبرمج من خلال الارتباط ببقايا PS المكشوفة خارج الخلية بسبب فقدان عدم تناسق غشاء الخلية.
س: هل من الممكن إجراء التحليل باستخدام Annexin V-FITC فقط دون الكشف عن PI؟
ج: نعم، من الممكن. بالنسبة لعينات الاختبار الخاصة، مثل خلايا الدم الحمراء الخالية من النوى، أو استخدام عقار دوكسوروبيسين (أدرياميسين) الذي يتداخل مع اكتشاف PI، من الممكن إجراء الاختبار باستخدام Annexin V-FITC فقط في كلتا الحالتين.
تفاصيل المنتج
| اسم المنتج | رقم الصنف. | مواصفة |
| مجموعة الكشف عن موت الخلايا المبرمج Annexin V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20 طن/50 طن/100 طن |
| 40302ES20/50/60 | 20 طن/50 طن/100 طن | |
| مجموعة الكشف عن موت الخلايا المبرمج Annexin V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20 طن/50 طن/100 طن |
| 40303ES20/50/60 | 20 طن/50 طن/100 طن | |
| مجموعة Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD للكشف عن موت الخلايا المبرمج | 40313ES60 | 100 طن |
| مجموعة Annexin V-YSFluor™ 488/PI للكشف عن موت الخلايا المبرمج | 40305ES20/50/60 | 20 طن/50 طن/100 طن |
| مجموعة Annexin V-YSFluor™ 647/PI للكشف عن موت الخلايا المبرمج | 40304ES20/50/60 | 20 طن/50 طن/100 طن |
| مجموعة Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD للكشف عن موت الخلايا المبرمج | 40312ES20/50/60 | 20 طن/50 طن/100 طن |
| 40306ES20/50/60 | 20 طن/50 طن/100 طن | |
| 40307ES20/50/60 | 20 طن/50 طن/100 طن | |
| 40308ES20/50/60 | 20 طن/50 طن/100 طن |