- RT-qPCR مدعوم بعكس عالي الكفاءة النسخ
إن إنزيم النسخ العكسي (RT enzyme) هو إنزيم قادر على تحويل قوالب الحمض النووي الريبي إلى الحمض النووي التكميلي (cDNA). وفي أبحاث علم الأحياء الجزيئي، يُستخدم إنزيم النسخ العكسي على نطاق واسع، وخاصةً أنه يلعب دورًا لا غنى عنه في مجال التشخيص الجزيئي. ومن خلال عملية النسخ العكسي، يمكن تحويل جينوم الحمض النووي الريبي للفيروسات إلى الحمض النووي التكميلي، والذي يمكن بعد ذلك تضخيمه واكتشافه باستخدام تقنيات مثل qPCR. وتتيح هذه الخاصية التشخيص الدقيق لفيروسات الحمض النووي الريبي، مثل فيروس نقص المناعة البشرية، والإنفلونزا A، والإنفلونزا B.
الشكل 1. مخطط تخطيطي لعملية النسخ العكسي
أصبح السعي وراء كواشف التشخيص الجزيئي RT-qPCR الأسرع والأكثر حساسية والأسهل في التشغيل هو الاتجاه الرئيسي الحالي للتطوير. كواحدة من المواد الخام الرئيسية في عملية RT-qPCR، يجب أن تمتلك النسخ العكسي سرعة نسخ عكسي أسرع، وعائد تخليق أعلى، ومقاومة أفضل للحرارة. من أجل الحصول على نسخ عكسي أكثر ملاءمة لـ RT-qPCR، يجب على Yeasen لقد طورت Hifairالعلامة التجارية سلسلة من النسخ العكسي من خلال التعديل الجيني على أساس M-MLV، تتميز بنشاط RNase H أقل، واستقرار حراري أعلى، وقدرة أقوى على التخليق المستمر.
الشكل 2. مخطط لعملية النسخ العكسي
هيفير™النسخ العكسي
لدى Yeasen مجموعة متنوعة من Hifairالعلامة التجارية النسخ العكسي، ويمكنه توفير مجموعة متنوعة من أشكال المنتجات، بما في ذلك الإنزيم والمزيج المسبق، يمكنك الاختيار وفقًا للاحتياجات الفعلية. يسرد الجدول التالي خصائص وتطبيقات النسخ العكسي المختلفة من Yeasen.
الجدول 1 إرشادات الاختيار من هيفير™ النسخ العكسي| اسم المنتج (رقم المنتج) ) | مميزات المنتج | التطبيق الموصى به |
| مستقر حراريًا (حتى 65 درجة مئوية)، ومناسب للقوالب المعقدة | مصباح RT | |
| توافق قوي وسرعة عالية وإنتاجية عالية في التوليف | خطوة واحدة تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي/تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي |
ملاحظة: جميع الإنزيمات المذكورة أعلاه متوفرة في تركيبات عالية التركيز أو خالية من الجلسرين.
نسلط الضوء الآن على النسخ العكسي المستخدم في الكواشف التشخيصية الجزيئية RT-qPCR: Hifairالعلامة التجارية V Reverse Transcriptase. يتميز هذا الإنزيم بتوافقه القوي وسرعته العالية وعائده العالي في التخليق، وقادر على تحمل درجات حرارة التفاعل حتى 58 درجة مئوية. وهو مناسب بشكل خاص لتطوير الكواشف التشخيصية الجزيئية RT-qPCR.
عرض أداء هيفير™ النسخ العكسي V
1. قادر على تحمل درجة حرارة تفاعل تبلغ 58 درجة مئوية، وهو مناسب للنسخ العكسي لقوالب الحمض النووي الريبي المعقدة.
الشكل 3. النسخ العكسي لإنزيم هيفيرالعلامة التجارية تم تحضين إنزيم النسخ العكسي V والعلامة التجارية T* عند 55 درجة مئوية و58 درجة مئوية على التوالي لمدة 30 دقيقة للكشف عن نشاط الإنزيم المتبقي. أظهرت النتائج أن Hifairالعلامة التجارية لا يزال بإمكان V Reverse Transcriptase الحفاظ على نشاط بنسبة 70% بعد الحضانة عند 58 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة، وهو أعلى بكثير من نشاط العلامة التجارية T*.
2. كان معدل اكتشاف RT-qPCR أفضل من العلامات التجارية الأخرى,و تكان مدى الكشف 1 بيكو جرام - 1 ميكرو جرام.
الشكل 4. باستخدام 1 بيكو جرام - 1 ميكروجرام (7 تدرجات) من إجمالي الحمض النووي الريبي لخلايا 293T كقالب، تم إجراء النسخ العكسي باستخدام Hifairالعلامة التجارية تم تحليل الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين الناتج عن عملية هضم الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين في خطوة واحدة باستخدام تقنية qPCR (رقم القطعة 11142)، V*، T*. وقد تم تحليل الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين الناتج عن عملية qPCR كميًا. وأظهرت النتائج أن حساسية 11142ES قد تصل إلى 1 بيكو جرام، وهو ما كان أفضل من حساسية العلامات التجارية الأخرى.
مكتبة الطفرات العكسية للنسخ
ياسين يستمر في تعزيز تطور النسخ العكسي مع محرر Zyme الخاص بهالعلامة التجارية حتى الآن، قمنا بفحص مجموعة متنوعة من الطفرات النسخية العكسية ذات الأداء الممتاز في تطبيقات مختلفة، والتي يمكنها تلبية احتياجات مجموعات العملاء المختلفة في مجالات التطبيق المتنوعة بشكل كامل.الجدول 2. ال دليل اختيار الطفرات الناتجة عن النسخ العكسي من ياسين
المنتجات الموصى بها
| تصنيف المنتج | اسم المنتج | رقم الكتالوج |
| سلسلة إنزيمات PCR عالية الأداء | بوليميراز الحمض النووي Hieff UNICON™ Hotstart E-Taq، 5 وحدة/ميكرولتر | 10726ES |
| 11300ES | ||
| 14455ES | ||
| 10603ES | ||
| 10125ES |