ما هو دور بوليميراز DNA Bst في LAMP؟
يمكن تقسيم تقنية تضخيم الأحماض النووية المتساوية الحرارة إلى العديد من الفئات وفقًا لمبادئ التضخيم المختلفة. في الوقت الحاضر، تعد تقنية التضخيم المتساوي الحرارة بوساطة الحلقة (LAMP) الأكثر شيوعًا واستخدامًا على نطاق واسع والتي طورها الباحث الياباني نوتومي وآخرون في عام 2000. إن بوليميراز الحمض النووي Bst هو الإنزيم الأساسي لتقنية التضخيم المتساوي الحرارة. ما هي وظيفة وأداء بوليميراز الحمض النووي Bst في LAMP؟
1. كيف يلعب بوليميراز DNA Bst دورًا في LAMP؟
2. ما هو بوليميراز Bst Plus DNA المجفف بالتجميد؟
3. ما هي ميزة المنتج؟ مجفف بالتجميد بيست زائد الحمض النووي بوليميراز (14405ES)؟
4. ما هو أداء المنتج المجفف بالتجميد؟ بيست زائد الحمض النووي بوليميراز(14405ES)؟
5. المنتجات ذات الصلة
6. فيما يتعلق بالقراءة
1. كيف يلعب بوليميراز DNA Bst دورًا في LAMP؟
الميزة التقنية لـ LAMP هي تصميم أربعة بادئات لست مناطق من الجين المستهدف وإجراء تفاعل التضخيم باستخدام بوليميراز الحمض النووي BST تحت ظروف درجة حرارة ثابتة تتراوح من 60 إلى 65 درجة مئوية، وتحقيق تضخيم 109-1010 مرات في غضون 15-60 دقيقة. يتمتع بوليميراز الحمض النووي Bst بثبات حراري قوي ونشاط إزاحة الخيوط ونشاط البوليميراز. يمكن أن يكون قالب تضخيم سريع وفعال ومحدد في ظل ظروف درجة حرارة ثابتة بدون دورة تضخيم حرارية لتفاعل البوليميراز المتسلسل، وإكمال تجربة LAMP بالكامل في غضون ساعة واحدة.
2. ما هو بوليميراز Bst Plus DNA المجفف بالتجميد؟
يستخدم بوليميراز الحمض النووي Bst Plus المجفف بالتجميد لتجميد بوليميراز الحمض النووي Bst Plus الخالي من الجلسرين، مما يحل مشكلة عدم استقرار إنزيم Bst الخالي من الجلسرين. في الوقت نفسه، يتمتع هذا المنتج بنشاط بوليميراز الحمض النووي القوي 5'-3'، ونشاط إزاحة الخيوط، وتحمل dUTP، وهو أكثر ملاءمة لتفاعل التضخيم الحراري المضاد للتلوث، وهو مناسب للعملاء للاستخدام في إنتاج المنتجات المجففة بالتجميد.
الشكل 1: 14405ES-Bst Plus DNA Polymerase المجفف بالتجميد (60 وحدة/ميكرولتر، خالٍ من الجلسرين)
3. ما هي ميزة المنتج المجفف بالتجميد؟ بيست زائد الحمض النووي بوليميراز(14405ES)؟
- إنزيم خالي من الجلسرين، مناسب للتجفيف بالتجميد
- النقل في درجة حرارة عادية لتقليل التكاليف
- نشاط إزاحة قوي للخيوط، حساس ومستقر
- إعادة الذوبان السريع والتشغيل المريح
4. ما هو أداء المنتج المجفف بالتجميد؟ بيست زائد الحمض النووي بوليميراز(14405ES)؟
4.1 شكل المسحوق المجفف بالتجميد: بالمقارنة مع لحظة T0، يظل شكل المسحوق دون تغيير بعد التجفيف بالتجميد عند درجة حرارة 45 درجة مئوية - 15 يومًا.
الشكل 2. شكل المسحوق المجفف بالتجميد
4.2 الاستقرار
يمكن أن يظل أداء المسحوق المجفف بالتجميد بعد التسارع الحراري متوافقًا مع أداء الكاشف السائل، والمسحوق المجفف بالتجميد (14405ES) هو
عالمي ويمكن استخدامه في طريقة الصبغة الفلورية وطريقة مؤشر الرقم الهيدروجيني.
4.2.1 طريقة الصبغة الفلورية - الاستقرار
في نظام تضخيم الصبغة الفلورية RT-LAMP، يتوافق أداء مسحوق Bst المجفف بالتجميد الخالي من الجلسرين بعد T0 و45 درجة مئوية -7 أيام و45 درجة مئوية -15 يومًا من التسارع الحراري مع أداء النسخة السائلة من إنزيم Bst الخالي من الجلسرين، ولا يصل NTC إلى ذروته.
الظروف التجريبية:
| نظام | RT-LAMP صبغة فلورية طريقة | أداة | س5، شبكة SLAN |
| نموذج | الحمض النووي الريبوزي لكوفيد-19 | تركيز | 50 نسخة/ت |
| إجراء | 37 درجة مئوية، دقيقتين. 65 درجة مئوية، 60 دقيقة |
ملحوظة: المجموعة الضابطة هي نسخة سائلة بدون إنزيم الجلسرين Bst بنفس التركيز.
الشكل 3. نتائج الاستقرار
4.2.2 طريقة الصبغة الفلورية - أداء إنزيم Bst بعد التجفيف بالتجميد لنظام RT-LAMP
في نظام تضخيم الصبغة الفلورية RT-LAMP، كان أداء المنتج لمسحوق Bst المجفف بالتجميد الخالي من الجلسرين والمجفف بالتجميد في نظام RT-LAMP بعد 45 درجة مئوية - 15 يومًا متسقًا مع أداء النسخة السائلة من إنزيم Bst الخالي من الجلسرين. كان معدل اكتشاف المنتج في المجموعة الضابطة ونظام RT-LAMP بعد التجفيف بالتجميد 100% (16/16) و94% (15/16) على التوالي.
الظروف التجريبية:
| نظام | RT-LAMP صبغة فلورية طريقة | أداة | س5، شبكة SLAN |
| نموذج | الحمض النووي الريبوزي لكوفيد-19 | تركيز | 50 نسخة/ت |
| إجراء | 37 درجة مئوية، دقيقتين. 65 درجة مئوية، 60 دقيقة |
ملحوظة: المجموعة الضابطة هي نسخة سائلة بدون إنزيم الجلسرين Bst بنفس التركيز.
الشكل 4. أداء إنزيم Bst بعد التجفيف بالتجميد لنظام RT-LAMP
4.2.3 طريقة مؤشر الرقم الهيدروجيني ——الاستقرار
في نظام تضخيم مؤشر الرقم الهيدروجيني RT-LAMP، بالمقارنة مع وقت T0، كان معدل اكتشاف مسحوق Bst المجفف بالتجميد 88% (7/8) بعد 45 درجة مئوية - 15 يومًا من التسارع الحراري.
الظروف التجريبية:
| نظام | طريقة مؤشر PH RT-LAMP | نموذج | الحمض النووي الريبوزي لكوفيد-19 |
| إجراء | 37 درجة مئوية، دقيقتين. 65 درجة مئوية، 60 دقيقة | تركيز | 50 نسخة/ت |
ملحوظة: المجموعة الضابطة هي نسخة سائلة بدون إنزيم الجلسرين Bst بنفس التركيز.
الشكل 5. نتائج الاستقرار
4.2.4 طريقة مؤشر الرقم الهيدروجيني - استقرار إعادة التجميد
في نظام تضخيم مؤشر الرقم الهيدروجيني RT-LAMP، بعد 45 درجة مئوية - 7 أيام من إعادة التجميد، يكون الأداء مستقرًا. المجموعة الضابطة هي إنزيم Bst السائل. بالمقارنة مع المجموعة الضابطة، فإن معدل اكتشاف 14405ES بعد التسارع الحراري هو 94% (30/32).
الظروف التجريبية:
| نظام | طريقة مؤشر PH RT-LAMP | نموذج | الحمض النووي الريبوزي لكوفيد-19 |
| إجراء | 37 درجة مئوية، دقيقتين. 65 درجة مئوية، 60 دقيقة | تركيز | 50 نسخة/ت |
ملحوظة: المجموعة الضابطة هي نسخة سائلة بدون إنزيم الجلسرين Bst بنفس التركيز.
الشكل 6. نتائج استقرار إعادة التجميد
4.3 الخصوصية
في نظام تضخيم الصبغة الفلورية RT-LAMP، لم يصل NTC ذو الـ 48 بئر إلى ذروته، وكانت خصوصية 14405ES 100%.
الظروف التجريبية:
| نظام | صبغة الفلورسنت RT-LAMP طريقة | أداة | س5، شبكة SLAN |
| نموذج | الحمض النووي الريبوزي لكوفيد-19 | تركيز | 50 نسخة/ت |
| إجراء | 37 درجة مئوية، دقيقتين. 65 درجة مئوية، 60 دقيقة |
ملحوظة: المجموعة الضابطة هي نسخة سائلة بدون إنزيم الجلسرين Bst بنفس التركيز.
الشكل 7. النتائج المحددة
5. المنتجات ذات الصلة
المنتجات ذات الصلة التي يمكن لشركة Yeasen توفيرها موضحة في الجدول 1.
الجدول 1.المنتجات ذات الصلة
| تحديد موقع المنتج | اسم المنتج | قطة# |
| إنزيم Bst شديد الحساسية | بوليميراز الحمض النووي Hieff™ Bst Plus (40 وحدة/ميكرولتر) | 14402ES |
| بوليميراز الحمض النووي Hieff™ Bst Plus (2000 وحدة/ميكرولتر) (الاستفسار) | 14403ES | |
| مجفف بالتجميد بيست زائد الحمض النووي بوليميراز ( 60 وحدة/ميكرولتر، خالية من الجلسرين | 14405ES | |
| طريقة الصبغ الفلوري | مجموعة تحليل الصبغة RT-LAMP (UDG plus) | 13762ES |
| طريقة مؤشر الرقم الهيدروجيني | مصباح RT الرقم الهيدروجيني حساس صبغ كروموجيني إصدار قابلة للتجميد والتجفيف الكاشف (الاستفسار) | 13920ES |
| كوفيد-19 | مصباح RT كوفيد 19 (درجة الحموضة مؤشر طريقة) مجفف بالتجميد خرز (الاستفسار) | 13919ES |
| مصباح RT كوفيد-19 التمهيدي يتقن مزج (ن) (الاستفسار) | 13995ES | |
| النسخ العكسي مناسب لـ RT-Lamp | هيفير™ 3 النسخ العكسي (الاستفسار) | 11111ES |
| هيفير™ 3 النسخ العكسي، خالي من الجلسرين (الاستفسار) | 11297ES | |
| مثبط الريبونوكلياز الفأري | مثبط RNase الفأري (40 وحدة / ميكرولتر) | 10603ES |
| مثبط RNase الفأري (200 وحدة / ميكرولتر، خالٍ من الجلسرين) | 10703ES | |
| UDG قابل للتغير بالحرارة | جليكوزيلات اليوراسيل DNA (UDG/UNG)، غير قابلة للتأثر بالحرارة، 1 وحدة/ميكرولتر (الاستفسار) | 10303ES |
| dUTP عالي النقاء | dUTP (محلول 100 مليمول) | 10128ES |
6. فيما يتعلق بالقراءة
اختيار المواد الخام الانزيمية الرئيسية الصحيحة لجعل LAMP /RT-LAMP أكثر حساسية وأسرع!
المبادئ التوجيهية لاختيار النسخ العكسي
YEASEN UDG: "الخبير في مكافحة التلوث" في تفاعلات PCR