- خلفية
البيانات الملخصة في هذا التقرير تم إجراؤها بواسطة شركة Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. لصالح MycAwayالعلامة التجارية مجموعة الكشف عن الميكوبلازما في الوقت الحقيقي باستخدام تقنية qPCR (2G) منتج.
البيانات الموجزة هي فقط للرجوع إليها من قبل المستخدم، ويحتاج المستخدم إلى التحقق من طريقة الميكوبلازما باستخدام عيناته الخاصة للتأكد من أن الطريقة يمكن أن تلبي متطلبات المستخدم. يُنصح جميع المختبرات التي تستخدم هذه المجموعة بالتحقق من المعلمات التالية: حد الكشف، والخصوصية، والمتانة.
يمكن لشركة Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. تقديم تقرير تأهيل مفصل لهذه المجموعة. إذا استخدم المستخدم هذا التقرير، فيجب التحقق فقط من الملاءمة (التي تتضمن حد الكشف والخصوصية).
محتوى التحقق:
| أداء | معلمات التحقق | نتائج التحقق |
| حد الكشف | حد اكتشاف سلالة الميكوبلازما | حد الكشف لـ 10 أنواع من الميكوبلازما الدوائية: 10 وحدات تشكيل مستعمرة/مل، تم اختبار كل منها 24 مرة بمعدل كشف ≥95%. |
| الخصوصية | تداخل مصفوفة العينة | تم اختبار 9 عينات مختلفة ومحاليل تخفيف الحمض النووي، ولم يتم الكشف عن أي ميكوبلازما. |
| التفاعل المتبادل | تم اختبار 14 سلالة و 6 خلايا هندسية شائعة الاستخدام في المستحضرات الصيدلانية الحيوية، ولم يتم الكشف عن أي ميكوبلازما. | |
| متانة | استقرار التجميد والذوبان | يمكن أن يتحمل 20 دورة تجميد وإذابة متكررة دون التأثير على أداء المجموعة. |
| استقرار التسارع الحراري | لا يتأثر في ظل ظروف 37 درجة مئوية لمدة 14 يومًا و 4 درجات مئوية لمدة 30 يومًا. | |
| توافق الأجهزة | متوافق مع ABI7500، وABI QuantStudio™5، وBio-Rad CFX96، وRoche LightCycler®480. | |
| التغطية | تغطية أنواع الحمض النووي للميكوبلازما | تغطي مقارنة قواعد البيانات باستخدام تسلسلات rRNA للميكوبلازما 16S 183 نوعًا ضمن فئة Mollicutes. |
- المواد والطرق التجريبية
2.1 مايكاوايالعلامة التجارية مجموعة الكشف عن الميكوبلازما في الوقت الحقيقي qPCR (2G)، البائع: Yeasen، رقم القطعة: 40619ES60.
2.2 مولبيورالعلامة التجارية مجموعة تحضير عينة الحمض النووي المتبقي المغناطيسي، البائع: Yeasen، رقم القطعة: 18461ES60.
2.3 يتم شراء معايير حساسية الميكوبلازما من مختبرات مينيرفا بيولابس (MB)، والتي يتم الحصول على سلالاتها من المجموعة الوطنية لثقافات النوع (NCTC). يتم استخدام معايير الحساسية للميكوبلازما المعطلة للتحقق المنهجي من طريقة تضخيم الحمض النووي (طريقة qPCR/PCR) للكشف عن الميكوبلازما. يتم شراء ما مجموعه 10 أنواع من الميكوبلازما بما في ذلك متطلبات EP 2.6.7 وJP G3. المعلومات الخاصة بالمعايير هي كما يلي:
| بائع | القطة رقم | رقم NCTC | أيه تي سي سي لا. | اسم المادة |
| مختبرات مينيرفا البيولوجية (MB) | 102-1003 | 10129 | 23838 | 10 وحدة تشكيل مستعمرة™ معيار الحساسية الميكوبلازما أرجينيني |
| 102-2003 | 10112 | 23714 | 10 وحدة تشكيل مستعمرة™ معيار الحساسية الميكوبلازما الفموية | |
| 102-3003 | 10115 | 19610 | 10 وحدة تشكيل مستعمرة™ معيار الحساسية ميكوبلازما غاليسيبتيكوم | |
| 102-4003 | 10119 | 15531 | 10 وحدة تشكيل مستعمرة™ معيار الحساسية الميكوبلازما الرئوية | |
| 102-5003 | 10124 | 25204 | 10 وحدة تشكيل مستعمرة™ معيار الحساسية الميكوبلازما الزليلية | |
| 102-6003 | 10117 | 19989 | 10 وحدة تشكيل مستعمرة™ معيار الحساسية الميكوبلازما المخمرة | |
| 102-7003 | 10130 | 17981 | 10 وحدة تشكيل مستعمرة™ معيار الحساسية الميكوبلازما هيورينيس | |
| 102-8003 | 10116 | 23206 | 10 وحدة تشكيل مستعمرة™ معيار الحساسية أكوليبلازما لايدلاوي | |
| 102-9003 | 10164 | 27556 | 10 وحدة تشكيل مستعمرة™ معيار الحساسية سبيروبلازما سيتري | |
| 102-11003 | 10113 | 23064 | 10 وحدة تشكيل مستعمرة™ معيار الحساسية الميكوبلازما اللعابية |
2.4 البيانات الأصلية: تم تسجيل النسخة الإلكترونية في "التقرير التجريبي" الملف الفرعي للملف الرئيسي 'MycAwayالعلامة التجارية مجموعة الكشف عن الميكوبلازما في الوقت الحقيقي باستخدام تقنية qPCR (2G).
2.5 الطرق: تم إنتاج المواد وطرق التشغيل المستخدمة في التجربة بشكل أساسي أو ضبطها بواسطة شركة Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co.، Ltd.، والتي تم تقييمها والتحقق منها لفترة طويلة، ويتم تطوير وتصنيع المجموعة وفقًا لنظام ISO 13485.
- محتويات ونتائج التأهيل
3.1 حد الكشف (LOD)
تم إجراء استخلاص الحمض النووي وكذلك الكشف عن سلالة الميكوبلازما القياسية 10 CFU/mL وفقًا لإرشادات السلالة القياسية بالإضافة إلى إرشادات مجموعة الاستخلاص والكشف. تم الحصول على إجمالي 24 تحليلًا لسلالة الميكوبلازما القياسية 10 CFU/mL. تم اختبار عينات NCS (عينة التحكم السلبية) وNTC (عينة التحكم بدون قالب) في وقت واحد في كل تجربة.
وأظهرت النتائج أن نتائج اختبار NCS وNTC كانت مرضية، وأن جميع العينات الـ 24 (10 CFU/mL) جاءت إيجابية، وهو ما يلبي متطلبات الحصول على 23 نتيجة إيجابية على الأقل من أصل 24 اختبارًا.
| لا. | اسم المادة | تركيز السائل البكتيري |
| 1 | الميكوبلازما أرجينيني | 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل |
| 2 | الميكوبلازما الفموية | 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل |
| 3 | ميكوبلازما غاليسيبتيكوم | 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل |
| 4 | الميكوبلازما الرئوية | 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل |
| 5 | الميكوبلازما الزليلية | 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل |
| 6 | الميكوبلازما المخمرة | 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل |
| 7 | الميكوبلازما هيورينيس | 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل |
| 8 | بلازما الدم لايدلاوي | 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل |
| 9 | سبيروبلازما سيتري | 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل |
| 10 | الميكوبلازما اللعابية | 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل |
الجدول 1 معلومات عن السلالات المعتمدة
| 10 وحدة تشكيل مستعمرة/مل | التجربة 1 | التجربة 2 | التجربة 3 |
| معدل الكشف | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
| المجموع | 24/24 | ||
الجدول 2 نتائج حدود الكشف
3.2 الخصوصية
3.2.1 نطاق اختبار الميكوبلازما
تمت مقارنة تسلسلات مسبار البادئ في المجموعة مع جينوم 16S rRNA في قاعدة البيانات. ومن خلال تحليل المعلومات الحيوية، تم التوصل إلى أن MycAwayالعلامة التجارية يمكن لمجموعة الكشف عن الميكوبلازما qPCR (طريقة الفحص) من NextSense Biologicals أن تغطي ما لا يقل عن 183 نوعًا من Zooxanthellae، بما في ذلك 120 نوعًا من الميكوبلازما، و9 أنواع من اليوريا، و33 نوعًا من سبيروبلازما، و7 أنواع من كوليسترونجيلا، وهكذا.
3.2.2 تداخل مصفوفة العينة
9 ركائز (MEM من Dulbecco، ووسط F-10 من Ham، ووسط M-199، ووسط F-12K من Ham، ووسط RPMI-1640، و5A من McCoy، وF-12K من Ham، وKaighn's+1.0mM/L من Glutamine، وL-15 LEIBOVITZ MEDTA +2.تم استخدام (05 ملي مولار L-Glutamine، DMEM-low Glucose Standard Medium) كعينات للتحقق من تداخل مصفوفة العينة، وأظهرت النتائج أن الوسط ليس له أي تداخل مع كواشف المجموعة.
3.2.3 مدى اكتشاف البكتيريا المرنة
مطلوب استخراج واكتشاف الميكوبلازما المعطلة (الميكوبلازما أرجينيني، والميكوبلازما الفموية، والميكوبلازما جاليسيبتيكوم، والميكوبلازما الرئوية، والميكوبلازما الزليلية، والميكوبلازما فيرمينتانس، والميكوبلازما هيورينيس، والميكوبلازما لايدلاوي، والميكوبلازما سيتري، والميكوبلازما اللعابية) بمعدل 10 وحدات تشكيل مستعمرة/مل بالإضافة إلى اختبار عينة NCS وNTC.
وأظهرت النتائج عدم اكتشاف NCS وNTC وكانت النتائج سلبية، وتم اكتشاف جميع أنواع الميكوبلازما العشرة وكانت النتائج إيجابية.
3.2.4 التفاعل المتقاطع
بالنسبة لـ 14 سلالة غير مرنة من البكتيريا بما في ذلك Clostridium (Clostridium perfringens، Clostridium acetobutylicum)، و Lactobacillus (Lactobacillus acidophilus)، و Streptococcus (Streptococcus mutans، Streptococcus pneumoniae)، وعدد من الكائنات الحية الدقيقة الأخرى الشائعة من العصيات والمكورات والفطريات (Staphylococcus epidermidis، و Acinetobacter baumannii، و Enterobacter aerogenes، و Micrococcus garciniae، و Pseudomonas aeruginosa، و Pseudomonalbacterium leucocephala، و Salmonella enterica enteritidis subsp. enterica، و Bacillus subtilis، و Bacillus sp. Bacillus cereus، و Bacillus cereus)، وست خلايا معدلة وراثيًا (HEK293، و 293T، و Vero، تم استخدام CHO و E.coli و SF9) للكشف عن الميكوبلازما باستخدام MolPureالعلامة التجارية مجموعة معالجة مسبقة لعينات الحمض النووي المتبقية باستخدام طريقة الخرز المغناطيسي (الزجاجات) وMycAwayالعلامة التجارية طقم الكشف عن الميكوبلازما qPCR (طريقة الفحص) (2G)، وتم إجراء كل تجربة في وقت واحد مع اختبار العينات PCS وNCS وNTC.
وأظهرت النتائج أن نتائج PCS وNCS وNTC كانت مرضية، وكانت عينات الاختبار سلبية ولم يحدث أي تفاعل متبادل.
3.3 المتانة
3.3.1 استقرار التجميد والذوبان
تم إخضاع مجموعة اختبار الميكوبلازما لتجارب التجميد والذوبان في ظل ظروف تتراوح من -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية، وأظهرت النتائج أن المجموعة كانت قادرة على تحمل 20 مرة من التجميد والذوبان المتكرر، ولم يتأثر أداؤها.
3.3.2 الاستقرار المتسارع
تم تسريع مجموعة الكشف عن الميكوبلازما بالحرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 14 يومًا وعند 4 درجات مئوية لمدة 30 يومًا على التوالي، وأظهرت النتائج أن أداء المنتج لم يتأثر.
3.3.3 قابلية تطبيق الأداة
بالنسبة لمجموعة الكشف عن الميكوبلازما، تم استخدام تركيزات مختلفة من التحكم الإيجابي وحمض الميكوبلازما الرئوي في المجموعة كعينات للاختبار، وتم إجراء التجارب على أربع علامات تجارية ونماذج مختلفة، وهي Thermo Scientific ABI7500، وThermo Scientific ABI Q5، وShanghai Hongshi SLAN-96S، وRoche LightCycler®480، على التوالي.تم إجراء التجارب على أجهزة qPCR من أربع علامات تجارية ونماذج مختلفة، وهي Shanghai Hongshi SLAN-96S وRoche LightCycler®480.
وأظهرت النتائج أن العينات المراد اختبارها تم الكشف عنها على أجهزة qPCR من نماذج مختلفة من الشركات المصنعة وكانت نتائج التحكم السلبية مؤهلة، ولم يتأثر أداء المجموعة.
- 4.مرجع
4.1 طريقة فحص الميكوبلازما <3301>. دستور الأدوية الصيني، الجزء الثالث [S]. بكين: مطبعة العلوم والتكنولوجيا الصينية، 2020: 542-543.
4.2 إرشادات للتحقق من صحة الطرق التحليلية <9101>. دستور الأدوية الصيني، الجزء الثالث [S]. بكين: مطبعة العلوم والتكنولوجيا الصينية، 2020: 682.
4.3 إرشادات للتحقق من صحة الطرق البديلة للاختبار الميكروبيولوجي للمستحضرات الصيدلانية <9201>. دستور الأدوية الصيني، الجزء الثالث [S]. بكين: مطبعة العلوم والتكنولوجيا الصينية، 2020: 684.
4.4 الميكوبلازما. دستور الأدوية الأوروبي[S]. الطبعة العاشرة، 2020: القسم 2.6.7، 194-199.
4.5 اختبار الميكوبلازما لركائز الخلايا المستخدمة في إنتاج المنتجات التكنولوجية الحيوية/البيولوجية <G3-14-170>. دستور الأدوية الياباني[S]. الطبعة الثامنة عشر، 2021: 2678-2682.
4.6 إيريكا جيه فراتز-بيريلا، فيليب أنجارت، رايان جيه جراهام، وآخرون. التأثيرات على سمات جودة المنتج للأجسام المضادة وحيدة النسيلة المنتجة في مزارع المفاعل الحيوي لخلايا CHO أثناء أحداث التلوث المتعمد بالميكوبلازما. التكنولوجيا الحيوية والهندسة الحيوية. 2020؛ 117(9): 2802-2815.
4.7 دميتري ف. فولوخوف، لوري ج. جراهام، كورت أ. برورسون، فلاديمير إي. تشيزيكوف. اختبار الميكوبلازما للركائز الخلوية والمواد البيولوجية: مراجعة للتقنيات غير الميكروبيولوجية البديلة. مجسات الخلايا المول. 2011 أبريل-يونيو؛ 25(2-3): 69-77.
4.8 AL Ingebritson, CP Gibbs, C. Tong, GB Srinivas. طريقة الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل لاختبار تلوث اللقاحات البيطرية والمنتجات البيولوجية بالميكوبلازما. Lett in Applied Microbiology. 2015 فبراير؛ 60(2): 174-180.
معلومات الطلب
| وصف | رقم القطعة |
| 18461ES | |
| مجموعة الكشف عن الميكوبلازما qPCR من MycAway™ (2جي) | 40619ES |