ملخص

إن بقايا الحمض النووي في الخلايا المضيفة عبارة عن شوائب مرتبطة بالعملية تشارك في إنتاج المواد البيولوجية، والتي لا تقلل من فعالية المواد البيولوجية فحسب، بل قد تشكل أيضًا مخاوف تتعلق بالسلامة مثل العدوى أو التسبب في الأورام. لذلك، فرضت الهيئات التنظيمية في بلدان مختلفة حدودًا على كمية الحمض النووي المتبقي في المواد البيولوجية.

توصي إرشادات منظمة الصحة العالمية وإدارة الغذاء والدواء الحالية بألا يتجاوز الحمض النووي المتبقي في المنتجات النهائية 10 نانوجرام/جرعة، كما تنص إدارة الغذاء والدواء أيضًا على أن الحمض النووي المتبقي في الحمض النووي للخلايا المضيفة للمستحضرات البيولوجية يجب ألا يتجاوز 100 بيكو جرام/جرعة. تنص المبادئ العامة لدستور الأدوية الأوروبي على أن معظم حدود الحمض النووي المتبقي للمنتجات البيولوجية يجب ألا تتجاوز 10 نانوجرام/جرعة، ولكن حدود الحمض النووي المتبقي للقاحات الفردية أكثر صرامة، على سبيل المثال، لا ينبغي أن يتجاوز الحمض النووي المتبقي في اللقاح المعطل ضد التهاب الكبد أ 100 بيكو جرام/جرعة، وأن الحمض النووي المتبقي في اللقاح ضد التهاب الكبد ب لا ينبغي أن يتجاوز 10 بيكو جرام/جرعة. تنص طبعة عام 2020 من دستور الأدوية الصيني، الجزء الثالث، على أن بقايا الحمض النووي في المستحضرات البيولوجية المنتجة على مصفوفة خلوية يجب ألا تتجاوز 100 بيكو جرام/جرعة، وأن بقايا الحمض النووي في اللقاحات المنتجة على مصفوفة بكتيرية أو فطرية يجب ألا تتجاوز 10 نانوجرام/جرعة.

بالإضافة إلى ذلك، بالنسبة لطرق تحديد بقايا الحمض النووي الخارجية، تقدم دستور الأدوية الوطني أيضًا توصيات إرشادية. تصف طبعة 2017 من USP40-NF35 General Provision 1130 من دستور الأدوية الأمريكي 3 طرق لتحديد بقايا الحمض النووي الخارجية، وهي تهجين مسبار الحمض النووي وطريقة العتبة وطريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي. يقترح دستور الأدوية الأوروبي تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي والطرق المناعية، وهما طريقتان تحليليتان حساستان لقياس الحمض النووي المتبقي في الخلايا المضيفة. ينص دستور الأدوية الصيني في إصدار 2020 من القواعد العامة الثلاث 3407 أيضًا على أن طرق الكشف عن بقايا الحمض النووي في الخلايا المضيفة هي تهجين مسبار الحمض النووي والتلوين الفلوري وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي.

من بينها، تتمتع طريقة qPCR بحساسية عالية جدًا وخصوصية تسلسل ودقة، مما يمكن أن يوفر وسيلة كشف موثوقة لصناعة الأدوية الحيوية في أبحاث العمليات ومراقبة جودة المنتجات النهائية، وأصبحت الآن طريقة الكشف المفضلة لكل مصنع للمنتجات البيولوجية.

ييسن للتكنولوجيا الحيوية مجموعات الكشف عن بقايا الحمض النووي

استنادًا إلى مبدأ qPCR للمسبار الفلوري، طورت Yeasen سلسلة من مجموعات الكشف السريع والمتخصصة عن بقايا الحمض النووي للخلايا المضيفة، بما في ذلك CHO وHEK293 وE.coli وVero وHuman وMDCK وHansenula polymorpha وPichia pastoris وما إلى ذلك. توفر هذه المجموعات الكشف المتخصص والسريع عن بقايا الحمض النووي في المنتجات الوسيطة وشبه النهائية والنهائية أثناء تطوير وإنتاج المواد البيولوجية مثل أدوية الأجسام المضادة ومنتجات العلاج الخلوي والجينات وأدوية البروتين المؤتلف واللقاحات.

ميزة

حساسية عالية: تم تطويره على أساس طريقة qPCR للمسبار الفلوري مع LLOD منخفض يصل إلى 0.05fg/µL؛

دقة عالية: استرداد العينات في نطاق 70%~130%؛

خصوصية عالية: لا يوجد تفاعل متبادل مع الحمض النووي غير ذي الصلة، مما يقلل من الإيجابيات الكاذبة في الكشف؛

الالتزام باللوائح: تم التحقق من صحتها بالكامل وفقًا لـ Chp و USP و ICHQ2 (R1) والمتطلبات الأخرى، والأداء وفقًا للمعايير التنظيمية الصينية والأجنبية؛

التعاون مع التدقيق: يتوافق إنتاج المنتج مع معايير نظام الجودة ISO13485، مع وثائق التدقيق المثالية.

ضمان الجودة: يتم تطوير المواد الخام للمجموعات بشكل مستقل، ويتم إنتاج مزيج qPCR ومنتجات الإنزيم الأخرى في مصنع إنزيم فائق النظافة.

طلب

أدوية الأجسام المضادة - الكشف عن الشوائب المتبقية في الخلايا المضيفة
اللقاحات الكشف عن الشوائب المتبقية في الخلايا المضيفة
أدوية البروتين المعاد تركيبه - الكشف عن الشوائب المتبقية في الخلايا المضيفة

أدوية العلاج بالخلايا الجينية الكشف عن الشوائب المتبقية في الخلايا المضيفة

مواصفة

برنامج الاختبار والتحقق		المعايير أو المتطلبات المرجعية	نأوتي
1. معايير المجموعة (المعايير المرجعية)		المقارنة بالمعايير الوطنية أو المعايير المعدة
2. لداخلي رأنجي	نطاق المنحنى القياسي	الرجوع إلى الدليل أو الوضع الفعلي (على سبيل المثال 30fg/μL~300pg/μL)
	ر²	≥0.98 (مجموعات PsYeasen ≥ 0.99)	متطلبات HCD في دستور الأدوية الصيني طبعة 2020 3407 الأحكام العامة
	المنحدر	-3.1~-3.8 (مجموعات PsYeasen -3.1~-3.6)	متطلبات HCD في دستور الأدوية الصيني طبعة 2020 3407 الأحكام العامة
	كفاءة التضخيم	90%~110%（（Psالمنحدر المقابل -3.1~-3.6، المتطلبات داخل الصناعة）
3. أالدقة	الانحراف عن المعيار الوطني للحمض النووي	<15%
3. أالدقة	معدل استرداد العينات	50%~150% (متطلبات داخل الصناعة) (70~130%)	متطلبات HCD في دستور الأدوية الصيني طبعة 2020 3407 الأحكام العامة
4. صالدقة	قابلة للتكرار	السيرة الذاتية <15%
4. صالدقة	دقة متوسطة	السيرة الذاتية <15%
5. سخصوصية		لا يوجد تدخل مع الحمض النووي الخارجي
6. لحد الكم		مستوى fg/μL
7. سالإستقرار	التجميد والذوبان المتكرر	10 مرات
	استقرار التسارع	2~8 درجة مئوية لمدة 30 يومًا، 37 درجة مئوية لمدة 14 يومًا
	فترة الصلاحية	تخزين عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة سنتين

الأرقام

حساسية عالية: LLOQ منخفض يصل إلى 0.3 fg/µL، LLOD منخفض يصل إلى 0.05 fg/µL.

1. كان النطاق الخطي لمجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلايا المضيف CHO (3G) 3fg/μL~300pg/μL، R²=1، وكانت كفاءة التضخيم 99.29%، وكان معامل التباين لقيمة الكشف لكل تركيز <15%.

الشكل 1. رسم بياني لمعايرة الحمض النووي CHO (3G) (يسار) ورسم خطي لمنحنى التضخيم (يمين)

2. الكشف عن الحمض النووي CHO (3G) عند أدنى نقطة تركيز للأغنية القياسية عند 3fg/uL وتركيزات أقل، 10 تكرارات لكل تركيز. أظهرت النتائج أنه عند تركيزات 0.3 fg/uL وما فوق، كان معامل التباين أقل من 20%، أي أن حد القياس الكمي لمجموعة تحليل بقايا الحمض النووي لخلايا المضيف CHO (3G) كان 0.3 fg/uL.

3. الكشف عن الحمض النووي CHO (3G) عند تركيزات 0.3 fg/μL وأقل عند حد التقدير الكمي (LOQ) لـ 20 تكرارًا لكل تركيز. أظهرت النتائج أن معدل الكشف عن 20 بئرًا مكررًا عند تركيزات 0.05fg/μL وما فوق كان ≥19 (أي أن معدل الكشف كان ≥95٪)، أي أن حد الكشف لمجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلية المضيف CHO (3G) يمكن أن يصل إلى 0.05fg/μL.

الشكل 3. نتائج اختبار qPCR لـ 0.05fg/μL CHO DNA (3G)

خصوصية عالية: لا يوجد تفاعل متبادل مع الحمض النووي لخلية مضيفة أخرى.

عند تقييم تداخل الحمض النووي الجينومي لأنواع الفئران ذات الألفة العالية مع الحمض النووي CHO (3G) وكذلك الحمض النووي الجينومي للخلايا المستخدمة عادة في إنتاج المواد البيولوجية مع كاشف الكشف عن الحمض النووي CHO، تداخلت منحنيات التضخيم لمجموعة التداخل والمجموعة الضابطة ولم يُشاهد أي تداخل (تظهر الرسوم البيانية التالية، بالترتيب، بيانات التداخل للحمض النووي الجينومي للفأر، وHEK293، وE.coli مع كاشف الكشف عن الحمض النووي CHO).

الشكل 4.نتائج تجارب التداخل مع مجموعة CHO DNA (3G)

معلومات المنتج

التصنيف	رقم الصنف	اسم المنتج	مواصفة
عينة المعالجة المسبقة	18461ES	مجموعة تحضير عينات الحمض النووي المتبقي المغناطيسي MolPure®	25 طن/100 طن
عينة المعالجة المسبقة	18467ES	مجموعة تحضير العينات MolPure® Mag48 FN	3×16T/6×16T
جهاز استخلاص الأحماض النووية	80511ES	جهاز استخلاص الأحماض النووية الآلي ذو 48 قناة	48 تدفقات
الكشف عن بقايا الحمض النووي	41307ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلايا المضيفة من شركة Vero (2G)	50 طن/100 طن
	41308ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلية المضيف E.coli (2G)	50 طن/100 طن
	41310ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي SV40LTA&E1A	50 طن/100 طن
	41317ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة لـ Hansenula polymorpha	50 طن/100 طن
	41319ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة MDCK	50 طن/100 طن
	41323ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي البلازميدي	50 طن/100 طن
	41324ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة لـ S. cerevisiae	50 طن/100 طن
	41325ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلايا البشرية المضيفة	50 طن/100 طن
	41328ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة Pichia pastoris	50 طن/100 طن
	41330ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لـ Sf9 وBaculovirus	50 طن/100 طن
	41331ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة HEK293 (3G)	50 طن/100 طن
	41332ES	مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة CHO (3G)	50 طن/100 طن

مقال سابق المقال التالي

مجموعات عالية الحساسية ، من فئة FG ، واكتشاف الحمض النووي المتبقي لمكافحة جودة المنتجات البيولوجية