تشو مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة (3ج)
ملخص المؤهلات (رقم الفئة: 41332ES60)
- خلفية
البيانات الملخصة في هذا التقرير تم إجراؤها بواسطة Yeasen Biotechnology لـ CHO منتج مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلايا المضيفة (3G). البيانات الموجزة مخصصة فقط للرجوع إليها من قبل المستخدم، ويحتاج المستخدم إلى التحقق من بقايا الخلايا المضيفة يتم استخدام طريقة DNA من خلال عينات خاصة بهم للتأكد من أن الطريقة يمكن أن تلبي متطلبات المستخدم. يُنصح جميع المختبرات التي تستخدم هذه المجموعة بالتحقق من المعلمات التالية: الخطية، والنطاق، والدقة، والإحكام، وحد الكم، والخصوصية، والمتانة.
يمكن لشركة Yeasen Biotechnology تقديم تقرير تأهيل مفصل لهذه المجموعة. إذا استخدم المستخدم هذا التقرير، فلن يتم تحديد مدى ملاءمته (بما في ذلك الدقة، دقة ويجب التحقق من (الخصوصية والجودة).
- المواد والطرق التجريبية
2.1 تشو مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة (3G)، البائع: Yeasen، رقم الفئة: 41332ES60.
2.2 مجموعة تحضير عينة الحمض النووي المتبقي المغناطيسي MolPure، البائع: Yeasen، رقم القطعة: 18461ES60.
2.3 البيانات الأصلية: تم تسجيل النسخة الإلكترونية في "تقرير التجربة" الملف الفرعي للملف الرئيسي تشو مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة (3G).
2.4 الطرق: تم إنتاج المواد وطرق التشغيل المستخدمة في التجربة بشكل أساسي أو ضبطها بواسطة Yeasen Biotechnology، والتي تم تقييمها والتحقق منها لفترة طويلة، ويتم تطوير وتصنيع المجموعة وفقًا لنظام ISO 13485.
- محتويات ونتائج التأهيل
3.1 نطاق الكشف
كان النطاق الخطي للمجموعة 3 بيكو جرام/ميكرولتر ~ 300 بيكو جرام/ميكرولتر مع R2=1، وكانت كفاءة التضخيم 99.09% مع معامل تباين <15% لكل اختبار تركيز.
الشكل 1 منحنى qPCR القياسي لـ CHO DNA (3G)
3.2 الدقة
3.2.1 رإعادة التأهيل
3.2.1.1 تجربة استعادة عينة فارغة من خلال الوخز بالإبر
عينات من CHO معايير الحمض النووي عند التركيزات العالية والمنخفضة: 30 بيكو جرام/ميكرولتر، 300 تم تحضير fg/μL و3 fg/μL على التوالي، وتم تحليلها بعد الاستخلاص باستخدام طريقة الخرز المغناطيسي لمجموعة المعالجة المسبقة لعينة الحمض النووي المتبقية (3 تم إجراء تكرارات الاستخلاص لكل عينة، وتم إجراء 3 تكرارات للتحليل لكل استخلاص، وتم تحليل استرداد العينات ومعاملات النسخ.
بالنسبة لتركيزات مختلفة من عينات الحمض النووي، تراوحت معدلات الاسترداد من 70% إلى 130%، وكانت جميع معاملات التباين أقل من 20%.
| نوع العينة | التركيز النظري | استخراج 1 يعني | استخراج 2 يعني | استخراج 3 متوسط | متوسط التركيز | السيرة الذاتية | استعادة |
| عينة فارغة | / | / | / |
| / | / | / |
| عينة الاسترداد 1 | 30 بيكو جرام/ميكرولتر | 27.07 | 27.51 | 28.27 | 27.62 | 2.20% | 92.06% |
| عينة الاسترداد 2 | 300 فغ/ميكرولتر | 285.53 | 301.25 | 295.71 | 294.16 | 2.71% | 98.05% |
| عينة الاسترداد 3 | 3 ميكروجرام/ميكرولتر | 3.50 | 3.54 | 3.31 | 3.45 | 3.56% | 115.00% |
الجدول 1 استعادة عينة فارغة من المسامير
3.2.1.2 تجربة استعادة عينة محاكاة للمسامير
تم استخراج عينات من نفس التركيز (300 fg/μL من DNA CHO) (تم إجراء 3 مكررات استخراج لكل عينة وتم إجراء 3 مكررات اختبار لكل استخراج) مع 5 محاليل خلفية مختلفة (بروتين عالي، حمض نووي عالي، درجة حموضة عالية ومنخفضة، ملح مرتفع) وتم تحليل استرداد العينات و CV.
تراوحت نسبة استرداد عينات الحمض النووي لحلول الخلفية المختلفة من 70% إلى 130%، مع جميع المتغيرات <20%.
| نوع العينة | التركيز النظري | استخراج 1 يعني | استخراج 2 يعني | استخراج 3 متوسط | متوسط التركيز | السيرة الذاتية | استعادة |
| العينة الأساسية | / | / | / |
| / | / | / |
| نسبة عالية من البروتين | 300 فغ/ميكرولتر | 302.29 | 332.86 | 342.76 | 325.97 | 6.47% | 108.66% |
| حمض نووي مرتفع | 284.47 | 290.66 | 308.76 | 294.63 | 4.28% | 98.21% | |
| عالية الملح | 272.96 | 286.25 | 312.91 | 290.71 | 7.00% | 96.90% | |
| درجة الحموضة عالية | 296.04 | 320.58 | 324.56 | 313.72 | 4.92% | 104.57% | |
| انخفاض الرقم الهيدروجيني | 314.77 | 327.89 | 340.26 | 327.64 | 3.89% | 109.21% |
الجدول 2 - استرداد عينة أساسية من المسامير
3.3 الدقة
3.3.1 قابلية التكرار
كرر الاختبار 10 مرات لمعايير CHO DNA بتركيز 3 fg/μL مع معامل تغير اللون <15%.
| التكرارات | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | يقصد | السيرة الذاتية% |
| قيمة الكشف (fg/μL) | 3.13 | 3.26 | 2.89 | 3.16 | 2.95 | 2.87 | 2.88 | 2.75 | 2.87 | 3.15 | 2.99 | 5.65% |
الجدول 3 نتائج التكرار
3.3.2 دقة متوسطة
قام ثلاثة من الباحثين بشكل مستقل باختبار عينات قياسية من الحمض النووي CHO عند تركيزات عالية ومنخفضة: 300 بيكو جرام/ميكرولتر، و3 بيكو جرام/ميكرولتر، و3 فروج/ميكرولتر، وتم إجراء ثلاث تكرارات لكل تركيز، وكانت معامل التغير لجميع البيانات التسع التي تم الحصول عليها <15%.
| خبرة |
التركيز الفعلي التركيز النظري | الحمض النووي CHO (3G) | ||
| 300 بيكو جرام/ميكرولتر | 3 بيكو جرام/ميكرولتر | 3 فغ/ميكرولتر | ||
| الخبرة 1 | التحديد 1 | 302.63 | 2.97 | 3.40 |
| التحديد 2 | 294.54 | 3.01 | 3.14 | |
| التحديد 3 | 287.67 | 2.99 | 3.01 | |
| تجربة 2 | التحديد 4 | 292.27 | 2.92 | 3.47 |
| التحديد 5 | 299.61 | 2.90 | 2.82 | |
| التحديد 6 | 305.73 | 2.93 | 2.90 | |
| الخبرة 3 | التحديد 7 | 301.06 | 3.17 | 3.15 |
| القرار 8 | 299.17 | 3.00 | 3.21 | |
| القرار 9 | 290.66 | 2.90 | 3.05 | |
| / | يقصد | 297.04 | 2.98 | 3.13 |
| / | السيرة الذاتية% | 2.03 | 2.80 | 6.85 |
الجدول 4 نتائج الدقة المتوسطة
3.4 الخصوصية
تم تقييم تداخل الحمض النووي الجينومي الخلوي المستخدم عادة في إنتاج المواد البيولوجية للتداخل مع كواشف الكشف عن الحمض النووي CHO، وتداخلت مجموعة التداخل مع مجموعة التحكم ولم يُشاهد أي تداخل (يُظهر الشكل أدناه، بالترتيب، بيانات التداخل للحمض النووي الجينومي للفأر، وMDCK، وHEK293، وE.coli مع كواشف الكشف عن الحمض النووي CHO).
الشكل 2 نتائج تجربة التداخل
3.5 حد الكميات
تم الكشف عن الحمض النووي لـ CHO عند 3 fg/μL و1 fg/μL و0.5 fg/μL و0.3fg/uL و0.1 fg/μL، مع 10 تكرارات لكل تركيز. أظهرت النتائج أن معامل التباين كان أقل من 20% عند تركيزات 0.3 fg/μL وما فوق. وهذا يعني أن حد القياس الكمي لمجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلية المضيف CHO (3G) كان 0.3 fg/μL.
|
التكرارات عنصر الاختبار | الحمض النووي CHO (3G) (fg/μL) | |
| كمية | نسبة إعادة الحساب% | |
| 1 | 0.28 | 93.33% |
| 2 | 0.26 | 86.67% |
| 3 | 0.32 | 106.67% |
| 4 | 0.30 | 100.00% |
| 5 | 0.33 | 110.00% |
| 6 | 0.23 | 76.67% |
| 7 | 0.29 | 96.67% |
| 8 | 0.37 | 123.33% |
| 9 | 0.31 | 103.33% |
| 10 | 0.28 | 93.33% |
| يقصد | 0.30 | / |
| السيرة الذاتية% | 13.09% | / |
الشكل 3. نتيجة اختبار qPCR لـ CHO DNA (3G)
3.6 حد الكشف
تم الكشف عن الحمض النووي CHO عند 0.3 fg/μL و0.1 fg/μL و0.05 fg/μL و0.01 fg/μL، مع 20 تكرارًا لكل تركيز. أظهرت النتائج أن معدل الكشف كان ≥19 (أي معدل الكشف ≥95%) في 20 بئر تكرار عند تركيزات 0.05 fg/μL وما فوق. وهذا يعني أن حد الكشف عن مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلية المضيف CHO (3G) كان 0.05 fg/μL.
الشكل 4. نتيجة اختبار qPCR لـ CHO DNA (3G)
3.7 المتانة
لقد تم اختبار هذه المجموعة وهي مناسبة، ولكن لا تقتصر على، الأدوات التالية:
| بائع | نماذج الآلات | كفاءة التضخيم | ر2 | حدود الكم | السيرة الذاتية | حدود الكشف | معدل الكشف |
| ثيرمو | أبي 7500 | 99.69% | 1 | 0.3 فغرام/ميكرولتر | 12.40% | 0.05 فغرام/ميكرولتر | 95.65% |
| ثيرمو | برنامج ABI QuantStudio5 | 99.26% | 1 | 0.3 فغرام/ميكرولتر | 15.30% | 0.05 فغرام/ميكرولتر | 100.00% |
| روش | لايت سايكلير480 | 2.05% | 0.978 | 0.3 فغم/ميكرولتر | / | 0.05 فغم/ميكرولتر | / |
| شنغهاي هونغشي | شبكة محلية | 101.14% | 0.999 | 0.3 فغم/ميكرولتر | 14.41% | 0.05 فغم/ميكرولتر | 95.65% |
الجدول 5 نتائج اختبار ملاءمة الأداة
3.8 الاستقرار
3.8.1 استقرار التجميد والذوبان
تم اختبار مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلايا المضيف CHO (3G) عن طريق التجميد والذوبان المتكرر 10 مرات، ولم يتأثر أداء المجموعة.
|
مؤشرات الاختبار أوقات التجميد والذوبان | المعلمة | الوقت T0 | تجميد وتذويب 10 مرات |
| معامل المنحنى القياسي | كفاءة التضخيم | 95.70% | 98.62% |
| ر2 | 1 | 1 | |
| حد القياس الكمي (0.3 fg/μL) | السيرة الذاتية | 15.31% | 17.16% |
| حد الكشف (0.05 fg/μL) | معدل الكشف | 95.65% | 100% |
الجدول 6 تحليل نتائج استقرار التجميد والذوبان
3.7.2 الاستقرار المتسارع
تم تخزين مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلايا المضيف CHO (3G) عند درجة حرارة تتراوح من 2 إلى 8 درجات مئوية لمدة 30 يومًا و37 درجة مئوية لمدة 14 يومًا على التوالي. ولم يتأثر أداء المجموعة بأي شكل من الأشكال.
|
مؤشرات الاختبار تسارع درجة الحرارة والوقت | المعلمة | التجربة 1 | التجربة 2 | ||
| الوقت T0 | 2~8 درجة مئوية 30 أيام | الوقت T0 | 37 درجة مئوية لمدة 14 يومًا | ||
| معامل المنحنى القياسي | كفاءة التضخيم | 100.53% | 102.61% | 101.76% | 101.84% |
| ر2 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| حد القياس الكمي (0.3 fg/μL) | السيرة الذاتية | 17.16% | 12.63% | 16.27% | 12.49 |
| حد الكشف (0.05 fg/μL) | معدل الكشف | 95.65% | 100% | 95.57% | 100% |
الجدول 7 تحليل نتائج الاستقرار المتسارع
3.9 حد الفراغ
3.9.1 لا يوجد تحكم بالقالب (NTC)
لم يكن هناك تحكم في القالب (NTC) وهو تخفيف الحمض النووي بـ 96 تكرارًا لإجراء اختبار qPCR الكمي، وكانت جميع قيم CT أعلى من 96 بئرًا مكررة تم اختبارها >40.
الشكل 5 نتائج تجربة NTC
3.9.2 عينة التحكم بالاستخراج السلبي (NCS)
كانت عينة التحكم في الاستخراج السلبية (NCS) عبارة عن تخفيف الحمض النووي، وتم استخراجها أولاً عن طريق المعالجة المسبقة للعينة، ثم تم إجراء qPCR، وكانت جميع قيم CT أعلى من 48 بئرًا مكررة تم اختبارها >40.
الشكل 6 مركز التحكم الوطني نتائج التجربة
- 4.مرجع
4.1 لجنة دستور الأدوية الصيني (ChPC). دستور الأدوية لجمهورية الصين الشعبية (المجلد الثالث) [S]. بكين: مطبعة العلوم الطبية والتكنولوجيا الصينية، ص 542-543، 2020.
4.2 NMPA، 2007: المبادئ العامة للمراجعة الفنية للتحقق من صحة الطريقة التحليلية لمراقبة جودة المنتجات البيولوجية.
4.3 ICH(2022)《التحقق من صحة الطريقة التحليلية Q2》، نسخة المسودة.
معلومات الطلب
| وصف | رقم القطعة |
| 41332ES | |
| مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة HEK293 (3G) | 41331ES |
| 41307ES | |
| مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة لبكتيريا الإشريكية القولونية (2G) | 41308ES |
| 18461ES | |
| مجموعة الكشف عن الميكوبلازما qPCR من MycAway™ (2G) | 40619ES |