عند استخدام الإنزيمات التقليدية عالية الدقة لتفاعل البوليميراز المتسلسل، فمن المحتم أن تواجه بعض المشكلات الشائكة. على سبيل المثال، قد لا تكون الدقة كافية، مما يؤدي إلى حدوث طفرات أو حذف في القواعد المستهدفة حتى بعد تسلسل الأجزاء المكبرة. كما أن وقت التضخيم طويل نسبيًا؛ في بعض الأحيان، قد يستغرق تضخيم جزء بحجم 5 كيلو بايت ما يقرب من ساعتين. الآن، تقدم XiaoYi تفاعل البوليميراز المتسلسل السريع عالي الدقة لحل مشاكلك! -- Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (مزيج مسبق عالي الدقة وسريع للغاية لتفاعل البوليميراز المتسلسل).
ال 2× هييف كاناس™ مزيج AdvanceFast PCR الرئيسي (مع الصبغة) يحتوي على مؤشر كهربي مضاف مسبقًا، مما يسمح باستخدام منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل مباشرةً في الكهربي. المنتجات المكبرة لها أطراف غير حادة. يوفر هذا المزيج عالي الدقة من الإنزيمات مزايا كونه سريعًا وبسيطًا وحساسًا للغاية ومحددًا بشدة ومستقرًا. في نظام التفاعل، يلزم إضافة البادئات والقوالب فقط. بالإضافة إلى ذلك، يحتوي المنتج أيضًا على مادة واقية محددة، مما يضمن أن المزيج المسبق عالي الدقة لتفاعل البوليميراز المتسلسل يحافظ على نشاط مستقر حتى بعد التجميد والذوبان المتكرر.
مميزات المنتج
- عالي الإخلاص: قليل عدم تطابق معدل، مع أ قاعدة عدم تطابق نسبة ل 231/300000 في عالي جي سي عرضة للطفرة تسلسلات؛
- سريع التضخيم سرعة: امتداد معدل مثل سريع مثل 5 ثواني لكل كيلو بايت؛
- واسع قابلية التطبيق: قادر ل تغطية الجينات مع 20-80% جي سي محتوى، يتحمل فأر محاليل و 20% دم؛
- جيد استقرار: يستطيع يكون مخزنة في 37 درجة مئوية ل 7 أيام بدون مؤثر منتج أداء؛
- سريع و مريح: ببساطة يضيف التمهيديات و نموذج ل التضخيم يأتي مع تحميل صبغ ل مباشر الرحلان الكهربائي.
عرض أداء المنتج
دقة عالية ومعدل عدم تطابق منخفض
باستخدام جينومات أنواع مختلفة كقوالب، تم اختيار ستة أجزاء غنية بـ GC والتي تكون عرضة بشكل كبير لطفرة/فقدان القواعد للتضخيم. تم استنساخ منتجات PCR ذات الصلة في ناقلات، وتم اختيار 100 استنساخ فردي لكل تسلسل للتسلسل لتأكيد حدوث عدم تطابق القواعد/الطفرة. أظهرت النتائج أن مزيج PCR الرئيسي عالي الدقة السريع (10164ES) كان له معدل عدم تطابق القواعد/الطفرة متفوق مقارنة بالكواشف ذات العلامات التجارية المحلية والدولية.
يمكن أن يصل وقت التمديد إلى 5 ثوانٍ/كيلو بايت
باستخدام خليط سريع عالي الدقة من الإنزيم (10164ES) والمنتج T، تم تضخيم شظايا مختلفة الطول (0.4-10 كيلو بايت) من 100 نانوجرام من قالب الحمض النووي الجينومي البشري بمعدل امتداد 5 ثوانٍ/كيلو بايت، مع وقت امتداد مطلوب يبلغ 5 ثوانٍ/كيلو بايت. أظهرت النتائج أن خليط سريع عالي الدقة من الإنزيم (10164ES) يمكنه تضخيم الشظايا في غضون 10 كيلو بايت بمعدل امتداد 5 ثوانٍ/كيلو بايت.
يمكن تضخيم أجزاء الجينات ذات محتوى GC مختلف
باستخدام خليط سريع عالي الدقة من الإنزيمات (10164ES) لتضخيم شظايا الجينات التي تحتوي على 23-76% من GC من قوالب الحمض النووي الجينومي البشري، مع ضبط وقت التمديد عند 5 ثانية/كيلو بايت. أظهرت النتائج أن المنتج يتمتع بخصوصية تضخيم جيدة وقادر على تضخيم شظايا ذات محتوى GC مختلف.
قادرة على تضخيم شظايا الجينات ذات محتوى GC المتنوع
استخدام خليط سريع عالي الدقة من الإنزيمات (10164ES) لتضخيم شظايا بأطوال مختلفة من عينات مختلفة، مع ضبط وقت التمديد على 5-10 ثوانٍ لكل كيلوباس. تشير النتائج إلى أن هذا المنتج يتميز بخصوصية تضخيم ممتازة ومتوافق مع تضخيم شظايا مختلفة من قوالب مختلفة.
ملاحظة: 1. الحمض النووي الجينومي للفأر 1 كيلو بايت؛ 2. الحمض النووي الجينومي للفأر 2 كيلو بايت؛ 3. الحمض النووي الجينومي للفأر 6 كيلو بايت؛ 4. الحمض النووي الجينومي للذرة 1 كيلو بايت؛ 5. الحمض النووي الجينومي للأرز 2 كيلو بايت-أ؛ 6. الحمض النووي الجينومي للأرز 2 كيلو بايت-ب؛ 7. الحمض النووي التكميلي البشري المكون من 293 خلية 1 كيلو بايت؛ 8. الحمض النووي التكميلي البشري المكون من 293 خلية 2 كيلو بايت؛ 9. الحمض النووي التكميلي البشري المكون من 293 خلية 3 كيلو بايت؛ 10. الحمض النووي التكميلي البشري المكون من 293 خلية 12 كيلو بايت؛ 11. مرق الإشريكية القولونية 8 كيلو بايت؛ 12. مرق الإشريكية القولونية 16 كيلو بايت؛ 13. الحمض النووي الجينومي للأرز 10 كيلو بايت-أ؛ 14. الحمض النووي الجينومي للأرز 10 كيلو بايت-ب؛ 15. الحمض النووي الجينومي للأرز 10 كيلو بايت-ج؛ 16. الحمض النووي الجينومي للأرز 20 كيلو بايت-أ؛ 17. الحمض النووي الجينومي للأرز 20 كيلو بايت-ب؛ 18. التضخيم المباشر للدم البشري 3 كيلو بايت.
معدل اكتشاف مرتفع لتضخيم القالب عبر الأنواع المختلفة
باستخدام خليط سريع عالي الدقة من الإنزيم (10164ES)، تم تضخيم أجزاء مختلفة من محتوى GC تتراوح من 0.5 إلى 10 كيلو بايت في نبات أرابيدوبسيس وبذور اللفت والبطاطس، مع وقت امتداد يبلغ 5 ثوانٍ/كيلو بايت. أظهرت النتائج أن خليط سريع عالي الدقة من الإنزيم (10164ES) يمكن أن يضمن تضخيمًا ناجحًا.
باستخدام خليط سريع عالي الدقة من الإنزيمات (10164ES)، تم تضخيم تسلسلات عشوائية (مختارة عشوائيًا) من نبات أرابيدوبسيس، وبذور اللفت، وذباب الفاكهة، والديدان الخيطية، وسمك الزرد، بأحجام شظايا تتراوح من 0.5 إلى 10 كيلو بايت وتغطي 20 إلى 80٪ من محتوى GC. تم ضبط وقت التمديد عند 5 ثوانٍ / كيلو بايت. أظهرت النتائج أن خليط سريع عالي الدقة من الإنزيمات (10164ES) يتمتع بمعدل اكتشاف مرتفع.
استقرار جيد
باستخدام خليط سريع عالي الدقة من الإنزيمات (10164ES) تم تسريعه بالحرارة وتخزينه عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 3 أيام و7 أيام على التوالي، لتضخيم شظايا الحمض النووي التي يبلغ حجمها 3 كيلو بايت و5 كيلو بايت من 100 نانوجرام من الحمض النووي الجينومي البشري، مع ضبط وقت التمديد عند 5 ثوانٍ/كيلو بايت. تظهر النتائج أن المنتج يتمتع بثبات جيد.
تعليقات العملاء على التجربة
حيوان gDNA-120bp-50%GC
تقييم العميل: عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل سريعة، والأشرطة مناسبة، ويمكن تحميلها مباشرة في كهربي هلام الأجار. أشرطة العلامة التجارية N منحازة لأعلى، وقد يكون ذلك بسبب تأثير المخزن المؤقت الخاص بها، ونظرًا لعدم إضافة أي مخزن مؤقت للتحميل، يمكن لهذا المنتج أن يحل محل الإنزيم عالي الدقة في بروتوكولي التجريبي الحالي.
نبات cDNA-729bp-45.13%GC
تقييم العملاء: بالمقارنة مع العلامة التجارية T، فإن أشرطة الاستنساخ أكثر وضوحًا وتوحيدًا، وعملية PCR بأكملها أسرع. ليست هناك حاجة لإضافة صبغة إضافية عند تشغيل الجل، وهو أمر مريح للغاية ويوفر الوقت.
ميكروبي gDNA-1158، 1953bp-58.8%، 52.9%GC
تقييم العملاء: بالمقارنة مع العلامة التجارية V، فإن التأثير قابل للمقارنة، ولكن شخصيا، أجد أنه أفضل.
نبات cDNA-2000bp-40%GC
تقييم العملاء: التأثير جيد جدًا، والشريط واضح.
دليل اختيار تفاعل البوليميراز المتسلسل عالي الدقة
| تحديد موقع المنتج | اسم المنتج | قطة# |
| 5 ثانية/كيلو بايت، تضمن الدقة والسرعة (مع صبغ) | 10164ES | |
| 5 ثانية/كيلو بايت، تضمن الدقة والسرعة (بدون صبغة) | 2× هييف كاناس™ مزيج رئيسي AdvanceFast PCR | 10163ES |
| 83×Taq، معدل اكتشاف مرتفع (مع الصبغة) | 2×هايف كاناس™ بالإضافة إلى مزيج PCR الرئيسي (مع الصبغة) | 10154ES |
| 83×Taq إنزيم واحد + عازل منفصل | 10153ES |