النسخ العكسي هو عملية تحويل الحمض النووي الريبي إلى الحمض النووي التكميلي (cDNA)، والتي تتم بواسطة إنزيم النسخ العكسي. في وجود بادئات التلدين، يرتبط النسخ العكسي أولاً بقالب الحمض النووي الريبي. يقوم نشاط بوليميراز الحمض النووي المعتمد على الحمض النووي الريبي للنسخ العكسي بتخليق الحمض النووي التكميلي عن طريق دمج dNTPs من خليط التفاعل. تؤدي هذه العملية إلى تكوين خيط هجين من الحمض النووي الريبي: الحمض النووي التكميلي، والذي يُعرف باسم تخليق الحمض النووي التكميلي ذي الخيط الأول.
إن إنزيم النسخ العكسي لفيروس ابيضاض الدم الفأري مولوني (M-MLV) هو أحد إنزيم النسخ العكسي المستخدم بشكل شائع في إجراءات مختبر علم الأحياء الجزيئي. لتحقيق كفاءة نسخ عكسي أعلى، واستقرار حراري أفضل، ومعدل متزايد من تخليق الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين، غالبًا ما يتم هندسة إنزيم النسخ العكسي الأصلي وراثيًا. حاليًا، تتطلب كواشف النسخ العكسي المتوفرة في السوق عادةً أوقات تفاعل تتراوح من 15 إلى 30 دقيقة، وهي طويلة نسبيًا. عندما يكون عدد عينات التفاعل كبيرًا، يمكن أن يزيد إجمالي الوقت المستغرق بشكل كبير. يمكن لمنتجات سلسلة النسخ العكسي التي تستغرق 5 دقائق من YESSEN إكمال عملية النسخ العكسي في غضون 5 دقائق فقط، مما يوفر الوقت ويكون فعالًا للغاية.
| صالمنتج صوضع | اسم المنتج | قطة# |
| مزيج مسبق للنسخ العكسي سريع وفعال وعالي الإنتاجية | هيفير™ مزيج فائق من سلسلة أولى من cDNA من AdvanceFast لـ qPCR | 11156ES |
| خليط مسبق للنسخ العكسي سريع وفعال وعالي الغلة (مع إزالة gDNA) | هيفير™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix لـ qPCR (DNA digester plus) | 11155ES |
| إتمام سريع في خطوة واحدة لإزالة gDNA وخلطة النسخ العكسي | هيفير™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix لـ qPCR | 11151ES |
| مجموعة النسخ العكسي السريع لاختيار البادئ المرن (مع إزالة gDNA) | هيفير™ مجموعة AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis (بدون صبغة) | 11150ES |
| مجموعة النسخ العكسي السريع لاختيار البادئ المرن (مع إزالة الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين وصبغة التتبع) | هيفير™ مجموعة AdvanceFast لتوليف cDNA من السلسلة الأولى | 11149ES |
توصية البوتيك رقم واحد
خليط مسبق للنسخ العكسي سريع وفعال وعالي الغلة (مع إزالة gDNA) (رقم القطعة 11155ES)
إنتاجية عالية للنسخ العكسي من قوالب مختلفة
| عينة | 293T خلية | أرابيدوبسيس ثاليانا | الفأر | كبد السمك |
| 11155ES | 23.4↓ | 19.6↓ | 24.9↓ | 21.1↓ |
| العلامة التجارية أ | 24.9 | 21.3 | 27.5 | 21.3 |
| العلامة التجارية ب | 26.1 | 20.5 | 27.1 | 23.1 |
| العلامة التجارية ج | 25.7 | 19.8 | 27.3 | 21.9 |
| العلامة التجارية د | 24.3 | 21.3 | 28.1 | 24.5 |
الشكل. تم إجراء النسخ العكسي باستخدام قوالب الحمض النووي الريبي من خلايا 293T البشرية، ونبات أرابيدوبسيس ثاليانا، وكبد الفئران، وكبد الأسماك. العلامات التجارية A وB وC وD كلها عبارة عن كواشف نسخ عكسي للهضم من خطوتين بأوقات نسخ عكسي متفاوتة من 15 إلى 20 دقيقة. تظهر نتائج الاختبار أن مجموعة النسخ العكسي Hifair 11155ES التي تستغرق 5 دقائق تتفوق في تحقيق عائدات أعلى مقارنة بالعلامات التجارية الأخرى، وقيم Ct أقل.
توصية البوتيك الثانية
خليط مسبق لعملية الهضم والنسخ العكسي في خطوة واحدة في 5 دقائق (رقم الكتالوج 11151ES)
إنتاجية عالية للنسخ العكسي
الشكل. باستخدام الحمض النووي الريبي لخلية 293T البشرية كقالب، تم اختبار ثلاثة جينات على التوالي. العلامات التجارية A وB وC هي كلها كواشف لإزالة الحمض النووي الريبي من خطوة واحدة والنسخ العكسي. تظهر نتائج الاختبار أنه مع إدخال 1 ميكروجرام و10 نانوجرام من الحمض النووي الريبي الكلي، فإن إنتاج النسخ العكسي باستخدام مجموعة 11151ES يتفوق على العلامات التجارية الأخرى، مع قيم Ct أصغر.
الشكل. باستخدام RNA لنبات أرابيدوبسيس ثاليانا كقالب، فإن العلامات التجارية A وB وC كلها عبارة عن كواشف لإزالة gDNA ونسخ عكسي بخطوة واحدة. تظهر نتائج الاختبار أنه مع إدخال 1 ميكروجرام و10 نانوجرام من إجمالي RNA، فإن إنتاج النسخ العكسي باستخدام مجموعة 11151ES يتفوق على العلامات التجارية الأخرى، مع قيم Ct أصغر.
حساسية ممتازة
الشكل. باستخدام الحمض النووي الريبي لخلية 293T البشرية كقالب، تم تضخيم الجينات التي تحتوي على 30% من GC و50% من GC و60% من GC و70% من GC. تم استخدام إجمالي مدخلات الحمض النووي الريبي 100 بيكو جرام و1 نانوجرام و10 نانوجرام و100 نانوجرام و1 ميكروجرام للنسخ العكسي متبوعًا بالكشف الكمي الفلوري. تظهر النتائج أن 11151ES يمكن أن يستوعب النسخ العكسي لمدخلات الحمض النووي الريبي التي تتراوح من 100 بيكو جرام إلى 1 ميكروجرام.
توصية بوتيك Tثلاثه
مجموعة النسخ العكسي السريع في 5 دقائقالقطة رقم 11149/11150ES)
حساسية عالية، مع حد أدنى للكشف يصل إلى 10 بيكو جرام
الشكل. باستخدام إجمالي الحمض النووي الريبي من خلايا 293T كقالب، تم إجراء النسخ العكسي باستخدام 11149ES، وتم إخضاع الحمض النووي الريبي التكميلي الناتج لتحليل كمي باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي. تظهر النتائج أن 11149ES يمكنه النسخ العكسي بنجاح لمدخلات الحمض النووي الريبي التي تتراوح من 10 بيكو جرام إلى 1 ميكروجرام، مما يضمن نتائج كمية دقيقة.
أداء تضخيم جيد، مع أطول تضخيم لشظية 14 كيلو بايت
شكل.باستخدام إجمالي الحمض النووي الريبي من خلايا 293T كقالب، تم إجراء النسخ العكسي باستخدام 11149ES، وتم إخضاع الحمض النووي الريبي التكميلي الناتج للكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل. تشير النتائج إلى أن 11149ES قادر على تخليق شظايا الحمض النووي الريبي التكميلي التي تتراوح من 1 كيلو بايت إلى 14 كيلو بايت في الطول، مع وجود سيناريوهات معينة قابلة للتطبيق في تفاعل البوليميراز المتسلسل اللاحق. إذا كان النسخ العكسي المباشر للشظايا التي يزيد طولها عن 10 كيلو بايت مطلوبًا، فمن المستحسن تمديد وقت النسخ العكسي إلى 20-30 دقيقة لضمان الحصول على الشظايا النهائية.
مقارنة كفاءة النسخ العكسي
| كمية مدخلات الحمض النووي الريبي | قيمة Ct | |
| 11149ES | العلامة التجارية أ | |
| 1 ميكروجرام | 15.2 | 15.5 |
| 100 نانوغرام | 18.0 | 18.5 |
| 10 نانوغرام | 21 | 21.7 |
| 1 نانوغرام | 24.5 | 25.1 |
| 100 صفحة | 29.1 | 29.7 |
| 10 صفحة | 32.7 | 34.3 |
الشكل. باستخدام إجمالي الحمض النووي الريبي من خلايا 293T كقالب، تم إجراء النسخ العكسي باستخدام 11149ES وBrand A، مع عدم خضوع 11149ES لخطوة إزالة gDNA. تم إخضاع cDNA الناتج لتحليل كمي qPCR. تظهر النتائج أن وقت النسخ العكسي لـ Brand A كان 13 دقيقة، بينما كان لـ 11149ES 5 دقائق. يكشف التحليل الكمي للمنتجات المختلفة أن قيم Ct لـ 11149ES أصغر أو مماثلة لتلك الخاصة بالعلامة التجارية المنافسة، مما يشير إلى أن كفاءة النسخ العكسي لمدة 5 دقائق لـ 11149ES تفوق أو تعادل تقريبًا تلك الخاصة بـ Brand A.
| كمية مدخلات الحمض النووي الريبي | قيمة Ct | |
| 11149ES | العلامة التجارية ب | |
| 1 ميكروجرام | 16.2 | 17.4 |
| 100 نانوغرام | 19.0 | 20.5 |
| 10 نانوغرام | 22 | 23.8 |
| 1 نانوغرام | 26 | 27.9 |
| 100 صفحة | 31.4 | 33.2 |
| 10 صفحة | 32.9 | 35.6 |
شكل.باستخدام إجمالي الحمض النووي الريبي من خلايا 293T كقالب، تم إجراء النسخ العكسي مع 11149ES وBrand B، مع عدم خضوع 11149ES لخطوة إزالة gDNA. تم إخضاع cDNA الناتج لتحليل كمي qPCR. تظهر النتائج أن وقت النسخ العكسي لـ Brand B كان 20 دقيقة، بينما كان لـ 11149ES 5 دقائق. يكشف التحليل الكمي لكميات الركيزة المختلفة أن قيم Ct لـ 11149ES أصغر أو مماثلة لتلك الخاصة بـ Brand B، مما يشير إلى أن كفاءة النسخ العكسي لمدة 5 دقائق لـ 11149ES تفوق أو تعادل تقريبًا تلك الخاصة بـ Brand B.
المنتجات ذات الصلة الموصى بها
| طريقة | صالمنتج صوضع | اسم المنتج | قطة# |
| qPCR القائم على الصبغة | خليط مسبق كمي عالمي عالي الخصوصية (يعتمد على الصبغة) | هييف يونيكون™ مزيج SYBR Master Mix المتقدم لـ qPCR | 11185ES |
| خليط مسبق كمي عالمي عالي الحساسية (يعتمد على الصبغة) | 11184ES | ||
| النسخ العكسي | خليط مسبق لعملية الهضم والنسخ العكسي في خطوة واحدة مدتها 5 دقائق (لـ qPCR) | هيفير™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix لـ qPCR | 11151ES |
| النسخ العكسي السريع لمدة 5 دقائق، قادر على تخليق ما يصل إلى 14 كيلو بايت من cDNA، مع إزالة gDNA (لـ PCR/qPCR) - إصدار Tracer | هيفير™ مجموعة AdvanceFast لتوليف cDNA من السلسلة الأولى | 11149ES | |
| النسخ العكسي السريع لمدة 5 دقائق، قادر على تخليق ما يصل إلى 14 كيلو بايت من cDNA، مع إزالة gDNA (لـ PCR/qPCR) | هيفير™ مجموعة AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis (بدون صبغة) | 11150ES | |
| خليط تحضيري عالي الجودة لتخليق سلسلة أولى من cDNA، مع إزالة gDNA (لـ qPCR) | هيفير™ مزيج فائق لتخليق cDNA من السلسلة الأولى III لـ qPCR (جهاز هضم gDNA بالإضافة إلى) | 11141ES |